收集细胞
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细胞涂片,自然晾干
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4%多聚甲醛固定20分钟
↓
PBS洗,3次/5min
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0.3%TritonX-100处理/室温10min
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PBS洗,3次/5min
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血清封闭60min
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一抗37℃1h(4℃孵育过夜)
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PBS洗,3次/5min
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二抗室温孵育40分钟
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PBS洗,3次/5min
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DAPI复染
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镜检并照相。
1,PBS洗涤细胞三次
2,用100ul抗体结合Buffer悬浮细胞,在EP管内操作,加入适当浓度的一抗,
冰上1小时
3,抗体结合Buffer洗涤细胞三次,完全去除上清
4,用100ul抗体结合Buffer悬浮细胞,加入适当浓度的二抗,冰上1小时
5,抗体结合Buffer洗涤细胞三次,完全去除上清
6,若上流式检测,可直接用500ulPBS悬浮细胞
7,若用荧光显微镜观察,可用适量PBS悬浮细胞,直接加到12孔板或6孔板中,等细胞沉下来后即可观察。
8,若共聚焦观察,可将100ul悬液滴到载波片上,盖上盖波片,观察。
9,抗体结合Buffer:PBS+3%BSA+3%血清
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