一、诱导肺癌细胞凋亡
1、中国香港城市大学生物化学系发表的国际医学论文的结论是：目前的研究表明，花旗松素能够抑制各种类型癌细胞的活性，具有抗癌作用。
2、河北大学附属医院和市第一医院联合发表的国际医学论文 论文的结论是：花旗松素对人肺癌细胞具有明显的抑制作用。Western blotting 实验结果进一步证实了花旗松素抑制肺癌细胞的恶化发展，花旗松素具有明显的诱导肺癌细胞凋亡的作用。
二、预防和治疗癌症
（一）、美国明尼苏达大学和韩国国家癌症研究所联合发表的国际医学论文的结论是：花旗松素可以预防多种癌症。在本研究中，花旗松素直接抑制EGFR和PI3-K癌变酶的活性，对皮肤癌具有预防和治疗作用。
（二）、日本国厚生労働省 关于花旗松素的研究结论 ★抗酸化・抗老化作用 抗酸化力により活性酸素を消去、免疫力の賦活（シミ、シワ、白内障、飛蚊症、加齢臭、ガン予防…など） ★.毛細血管保護 血管壁強化。（炎症性疾患、動脈硬化、脳血管障害、歯茎からの出血、青あざ、高血圧の改善） ★抹消血液循環の改善 赤血球の変形する能力を高めることにより、手足や臓器のすみずみまで血流が改善され、酸素が行きわたる。（白内障、飛蚊症、耳鳴り、冷え、しびれ、肩こりなどの改善） ★美肌、アンチエイジング 高度の抗酸化力と血流改善による。 ★.抗炎症・抗アレルギー 体内での副腎皮質ホルモンの産生促進。（炎症の緩和やアレルギー症状の緩和 ） ★肝臓保護 肝臓の解毒機能を高める。（肝臓障害の改善） ★.脂質代謝、高コレステロール、中性脂肪の改善。（過酸化脂質の予防） ★利尿作用（むくみの改善） ★II型糖尿病および合併症 毛細血管保護作用により血管劣化の修復。（糖尿性網膜症などの合併症改善 ） ★.肺機能改善（肺疾患、気管支炎などの改善） ★.脳保護作用 慢性的脳血流不全を改善。（頭痛、めまい、耳鳴り、不眠症、うつなどの改善） ★放射線治療時の副作用軽減 ★抗癌細胞
（三）、防治宫颈癌
翟延君， 程 飞， 王添敏， 初正云， 李 娜 (辽宁中医药大学药学院，辽宁大连116600)
摘要：
目的观察和探索花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性及其作用机理。方法 结晶紫染色法检测花 旗松素对人Hela细胞的增殖抑制作用；RT—PCR法检测与肿瘤细胞凋亡相关基因的表达。结果 花旗松素能够 抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖，呈剂量依赖关系；花旗松素不能诱导Bcl一2 mRNA和Bax mRNA的表达，但能使P53和 P21的mRNA表达量增加。结论花旗松素具有良好的体外抑制人宫颈癌Hela细胞增殖作用；花旗松素诱导Hela细胞 死亡与细胞凋亡相关，其分子机制可能与升高P53和1'21mRNA表达有关，而与Bcl一2和Bax的蛋白转录无关。
关键词：花旗松素；人宫颈癌Hela细胞；抗肿瘤作用；
RT—PCR 中图分类号：R966 文献标志码：
A 文章编号：1001—1528(2011)12．2052-04
中药水红花子为蓼科植物红蓼Polygonum ori— entale L．的干燥成熟果实，资源极其丰富。
本品性 寒，味咸；具有散血消瘕、消积止痛的功效；用于瘕瘕 痞块、瘿瘤、肿痛、食积不消、胃脘胀痛等症。水红花 子主要含黄酮类化合物，其中花旗松素是特征性成 分，已作为对照品被2010年版《中国药典》收载，为 含量测定的指标成分HJ。根据水红花子具有抗肿 瘤作用的文献报道_2。J，本课题组进行了花旗松素对 人宫颈癌Hela细胞形态的影响及DNA片段的影响实验’4J。
本实验通过花旗松素对人宫颈癌Hela细 胞的增殖抑制作用实验和对凋亡相关基因Bcl．2 mRNA、Bax mRNA转录的影响，进一步探讨花旗松 素对人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性及其机 理，为水红花子药效学研究提供参考资料。
材料和方法
1．1 细胞株人宫颈癌HeLa细胞(中国科学院上 海细胞生物所)。
1．2药品与试剂 花旗松素(北京百灵威化学技术有限公司)，阳性对照：5氟尿嘧啶(5一Fu，天津金 耀制药厂)。新生牛血清NBS(大连生物试剂公 司)，胰酶(Sigma)，RPMll640培养基(GIBCO，NY， USA)，青霉素、链霉素(天津TBD公司)，结晶紫 (Sigma)，琼脂糖凝胶(Sigma)，AMV逆转录酶(Sig— ma)，TaqDNA聚合酶(Sigma)，扩增引物B．actin， P53，P21，Bax，Bcl-2(北京鼎国公司)，RNA酶抑制 蛋白(Sigma)，Trizol试剂、oligo(dT)(北京鼎国 公司)。
1．3仪器与设备二氧化碳培养箱(REVCO)，酶 联免疫分析仪(Bio—Rad model 450)，倒置显微镜(O． LYMPUS，CK2 China)，水平式电泳仪(北京六合仪 器厂)，高速冷冻离心机，PCR仪(联星公司产品)， 6-孑L板和96孔板(NUNC。M Denmark)，凝胶成像仪
f ELETROPHRESIS DOCUMEN．TATION AND ANAL．
YSIS SYSTEM 120)。
1．4细胞复苏与培养从一70℃冰箱中取出Hela 细胞冻存管，迅速放入37℃水浴融化，融化后用吸 管吸出细胞悬液，注入离心管并滴加10倍以上培养 液，混合后1 000 r／min离心5 min，弃上清液，用 RPMI一1640培养液洗涤1次。然后将细胞接种在含 有10％新生小牛血清及青霉素、链霉素的RPMI． 1640培养液的培养瓶中，置于37 oC，5％CO，、饱和 湿度的孵箱中培养，维持细胞处于对数生长期备用。
1．5肿瘤细胞的体外生长抑制实验将待测细胞 (2×104个／孔)接于96孔板中(NUNC。”，Den． mark)，加入100 IxL的培养液，培养4 h，待细胞贴壁 后换成2％小牛血清和不同浓度样品的RPMI．1640 培养液，继续培养。培养12、24、36、48 h后，将含有 不同浓度样品梯度的培养液倒掉，用50¨L结晶紫 染色15～20 min，然后再将结晶紫倒掉，将未染色的 结晶紫洗掉，由于结晶紫能够将活细胞染色，此时还 未死的细胞贴在培养瓶底壁上，并被染成蓝色。在 36℃左右烘干，备用。待测时用50恤L的甲醇溶 解，再用酶标仪(ELX 800)测定595 nm的吸收值， 根据吸收值计算抑制率。公式为：生长抑制率=(1 —4实验组／A对照组)×100％，每次实验重复3次。
1．6 RT—PCR检测Bcl一2 mRNA、Bax mRNA及1753 mRNA、P21 mRNA的表达接种1×106／瓶以上个 待测细胞，加入适量培养液，待细胞贴壁后，将培养 液换成含花旗松素质量浓度为50¨g／mL的新培养 液，分别培养0、12、24、36、48 h后，将每个培养瓶中 的所有细胞收集起来，细胞用PBS反复洗涤数次 后，将细胞沉淀溶于1 mL的PBS中，转移至1．5 mL
EP管中，2 500 r／min离心5 min，收集细胞沉淀；利 用Trizol试剂提取细胞内总RNA。以提取的总 RNA为模板，以Oligo．dT协。。为引物进行反转录，以 反转录后的cDNA为模板，利用上述合成的引物，进 行PCR扩增，反应条件为：94℃，30 S；55℃，40 S； 72℃，45 S，30个循环；72℃延伸5 rain，反应完毕， 将样品于2％琼脂糖凝胶电泳检测(表1)。
1．7统计分析实验数据采用SPSS 13．0统计软 件进行数据处理，各组间均数采用t检验，结果以 i±s表示。
结果
2．1 花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制实 验花旗松素有较好的抑瘤效果，细胞死亡率随剂 量的增加而增加。在样品质量浓度为50仙g／mL，培 养48 h，5-FU的抑瘤率为61．2％，花旗松素抑瘤率 为88．2％，比5-FU效果好(表2)。
2．2 花旗松素对凋亡相关基因Bcl-2 mRNA、Bax mRNA转录的影响本实验通过花旗松素诱导Bcl一 2 mRNA和Bax mRNA的表达变化，从基因转录水 平研究其诱导HeLa细胞死亡是否与Bcl-2／Bax途 径相关。实验结果表明：花旗松素50斗g／mL培养 0、12、24、36、48 h，Bcl一2 mRNA和Bax mRNA的表达 均没有变化，说明花旗松素诱导HeLa细胞凋亡与 Bcl一2和Bax的途径无关(图1)。
2．3 花旗松素对凋亡相关基因1753 mRNA和P21 mRNA转录的影响P21和1753的主要功能是使受 短波紫外辐射、化疗药物诱导等引起DNA损伤的细 胞，产生细胞周期抑制，进而凋亡，避免错误基因的 复制，是细胞保持基因稳定的重要蛋白。P53这种 作用主要依赖抑癌基因P21来完成。对于有DNA 损伤的细胞，通过激活P53基因启动P21基因表达
来诱导细胞凋亡。本实验结果表明：花旗松素 50斗g／mL培养0、12 h时表达没有明显变化，而24、 36、48 h诱导1：'53 mRNA和P21 mRNA的表达增加
讨论
3．1 花旗松素是水红花子的特征性成分，已作为对 照品被2010年版《中国药典》收载，水红花子现代 研究报道具有抗肿瘤作用，对原发性肝癌及子宫肌 瘤的治疗有较好的效果。宫颈癌是女性生殖系统常 见的恶性肿瘤之一，其发病率占女性恶性肿瘤第二 位。探讨花旗松素抗肿瘤作用及其作用机理，对开 发新的抗肿瘤药物有一定意义。本实验通过花旗松 素对人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性及其机 理研究，可为水红花子抗肿瘤作用药效学研究提供 参考资料。
3．2体外抗肿瘤实验结果可知：花旗松素有良好的 体外抑制人宫颈癌Hela细胞作用，抑制率随着剂量 的增加及时间的延长而增大。前期的形态学检验结 果”1表明，用花旗松素处理12 h后，人宫颈癌Hela 细胞变圆并从培养瓶壁上逐渐脱落下来，24 h后细 胞膜发泡并呈现细胞核迸裂，大部分细胞逐渐形成
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凋亡小体，说明人宫颈癌HeLa细胞死亡与细胞凋 亡途径有关。 3．3 本实验选择两种途径探讨了花旗松素诱导 Hela细胞凋亡机理，一种是与线粒体有关的Bcl-2／ Bax途径，另一种是与细胞周期相关的P53／P21途 径。实验结果显示，Bax的mRNA和Bcl-2的mRNA 的表达水平均没有变化，说明花旗松素诱导HeLa 细胞凋亡与Bcl·2／Bax的转录途径无关；P53的mRNA表达量升高，而P21的mRNA的表达量也表现 为升高，说明花期松素能够诱导P53 mRNA和P21 mRNA的表达增加，诱导HeLa细胞凋亡与细胞 DNA损伤和细胞周期的抑制有关。
三、预防和治疗脂肪肝、肝癌
1、美国夏威夷癌症研究中心和加拿大癌症研究中心联合发表关于花旗松素预防和治疗人脂肪肝和肝癌的国际医学论文 论文的结论是：花旗松素可以减少肝脏脂肪形成，在载脂蛋白B和载脂蛋白A-1分泌的伴随减少和增加，同时具有抑制肝癌细胞恶性发展的作用。
2、辽宁省中医药大学发表花旗松素预防和治疗人胃癌、肝癌、盲肠癌的国际医学论文 论文的结论是：花旗松素具有对人胃癌MGC细胞、人肝癌HepG-2细胞和人盲肠癌Hce-8693细胞的增殖抑制作用。
四、目前发现的活性最强的抗氧化剂
1、在美国，二氢槲皮素（花旗松素）由新泽西库克大学生物科技中心进行测试，测试号码：08901-8520 USA，二氢槲皮素（花旗松素）被列入在美国食品和药物管理局（FDA）的列表中，以维生素P进行制药生产，它是很好的细胞毒性物质钝化剂、肿瘤保护剂、放射防护剂、毛细血管保护剂、胃炎保护剂、肝脏保护剂、免疫监控剂，具有改善冠状动脉血流量、提高心肌收缩力，减少肌肉的区域兴奋，减少肝脏、血液和血浆中的胆固醇水平等良好功效。化妆品和日化用品领域：在化妆品生产中作为抗氧化剂、抗衰老剂，可增强皮肤弹性，消除青春痘和化脓性皮疹，改善头发发质，花旗松素在面霜和香皂中作为一种添加剂，可以延缓皮肤老化，活化肌肤细胞，花旗松素作为护发素和护发药剂可促进头发的生长，同时保持头发和头皮的健康。
2、抗心肌缺血
【机构】 黑龙江中医药大学北药基础与应用研究部省共建重点实验室黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室；
【摘要】 目的:研究二氢槲皮素对异丙肾上腺素致大鼠心肌缺血的保护作用,探讨其对冠心病的防治作用及机制。方法:将SD大鼠随机分为空白组、模型对照组、阳性对照组(地奥心血康42 mg.kg-1)、二氢槲皮素高、中、低剂量组(6.4,3.2,1.6mg.kg-1)。皮下注射5 mg.kg-1异丙肾上腺素(ISO)造成心肌缺血性损伤模型后观察心电图(ECG)的变化,检测血清和心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和血清中肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)含量变化,并对大鼠心肌组织进行了病理切片检查。结果:二氢槲皮素能改善大鼠ECG的J点位移,显著降低心肌缺血大鼠血清中CK,CK-MB,LDH的含量,升高心肌组织匀浆中SOD活力,降低心肌组织匀浆中脂质过氧化终产物MDA的含量。结论:二氢槲皮素能有效抑制ISO所致心肌组织缺血,保护心肌细胞免受损伤,从而起到治疗冠心病的作用。
【关键词】 二氢槲皮素；心肌酶；心肌缺血；冠心病；异丙肾上腺素；
五、药理作用
1.抗癌：对小鼠白血病P388有活性，150和100mg/kg的生命延长率分别为40%和37%。
2.抗菌：对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌和伤寒杆菌有较强的抑菌作用。
根据俄罗斯国家药典（2006年版）相关记载，
花旗松素药理作用如下：
1、强抗氧化能力：可有效去除人体内有破坏作用的自由基与毒素，保护修复细胞，促进维生素C的吸收，阻止维生素C被氧化，抑制疾病的发展。
2.增强免疫力：可快速缓解疲劳，激活长寿基因，延缓细胞衰老，具有解毒作用。
3.防治肿瘤癌症：可抑制磷状细胞癌的生长和恶性淋巴细胞病变；
4．防治心脑血管疾病：激活血管壁细胞，增强血管弹性，减少中风和心脏病的发生几率，具有增强心脏活力、改善微循环，改善风湿关节炎等作用。
5.平衡血脂：可通过调节酶的活性影响脂代谢，抑制细胞内胆固醇的合成，平衡血液中的胆固醇和甘油三酯。
6.解毒护肝：可修复肝损伤，帮助肝脏排毒，对肝炎、脂肪肝等有明显的改善和康复作用。
7.改善胃肠功能：提高胃动力，抑制肠道有害菌，促进胃黏膜再生，可缓解慢性胃炎、胃溃疡和慢性肠炎等疾病症状。
8.美白肌肤：恢复皮肤中的胶原蛋白的弹性，抑制黑色素的生成，淡斑美白，对各种皮炎，皮癣、湿疹、痤疮等皮肤疾病效果独特。
六、应用范围
花旗松素是从长白山落叶松根部提取的一种黄酮类化合物,主要产自俄罗斯,全世界年产量不足20吨。产品应用范围广泛，概括为四个主要方面：
一是食品加工业：利用其超强抗氧化性和生物活性用作食品添加剂，可延长食品有效期2-3倍；
二是医药保健品业：用于制造治疗高血压、延缓衰老、遗传异常，抗辐射，提高免疫力，抑制癌细胞功能，美国专家已对该产品进行了深层次研究，该产品具有抑制和防治皮肤癌的作用；
三是工业：花旗松素超过了许多已知的正在使用中的抗氧化剂，如发动机和喷气火箭原料的抗震剂，火箭原料和碳氢化合物原料的稳定剂，颜料和油漆的抗氧化剂。
四是农业、林业：以花旗松素提取废料为主要原料的“植物生长调节剂”，可降低细菌和真菌对植物发芽、生长、结果期的影响，增强其耐寒、旱和贮藏性,提高农作物产量，也可用于林业系统的苗木培育，提高苗木质量和造林成活率。
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