※. 多种突变形式的新探索
※. ATP7B基础研究新突破
※. 回顾性临床研究新启示
※. 药物与基因治疗新尝试
一、大片段缺失的新发现
本团队运用 MLPA 技术发现6例大片段缺失突变的突变。其中3例基因内部的缺失,1例全ATP7B基因缺失。并且采用long-term PCR技术寻找到了断裂点,提出了基因内的大片段缺失与非同源末端的连接方式有关的设想。
二、同义突变也致病
该研究关注于ATP7B中的同义突变c.4014T>A和错义突变c.2755C>G 也可导致ATP7B外显子跳跃突变。该结论提示异常外显子跳跃与破坏剪接增强子和新增沉默子有关。这是WD以前未被认识的机制之一,拓展了WD的新的突变谱。
一、自噬保护WD病人铜过载细胞
研究人员利用WT-hepG2和KO-ATP7B-hepG2细胞,运用RNA测序发现,与野生型细胞相比,ATP7B敲除细胞在调节自噬的103个基因的表达上有显著增加,并且在WB、电镜下的超显微结构中也证明了这一点。得出ATP7B缺乏的肝细胞,激活自噬反应以防止铜诱导的凋亡的结论,提出了激活自噬途径的药物可用于未来WD治疗的新设想。
二、肠道内ATP7B表达机制研究
研究发现,肠道中的ATP7B是沿十二指肠隐窝 - 绒毛轴来保持铜梯度的,并以此缓冲肠细胞胞质中的铜水平。肠道的ATP7B酶是一种铜依赖性的快速囊泡。 在ATP7B-KO小鼠中观察得出,肠道内铜的存储池减少,铜耗尽后,在肠上皮细胞中甘油三酯的填充的囊泡逐渐累积,从而导致载脂蛋白B的错误定位和乳糜微粒的损失。除此之外,给予过量的铜或铜螯合剂也会损害乳糜微粒的组装。
研究发现,通过疾病-表型的预测,诊断时的年龄是一个决定预后的关键因素。移码突变和男性的WD患者,增加了发展神经表型的几率。利用欧洲WES的大数据发现,罕见的等位基因ESD和INO80中的变体可分别增加和减少神经表型的几率;APOE和MBD6中的罕见变体降低了WD早期发病的几率。复合杂合突变的病人更容易早期发病。
《Anna Kluska, Liver Int. 2018》
在一项回顾性多中心研究中,对136名WD患者中的282例妊娠进行了回顾。记录疾病发作年龄,受孕年龄和WD针对性治疗,记录了怀孕期间的母亲并发症分析了怀孕期间的医学治疗,自然流产率和出生缺陷率。研究结果发现,怀孕的WD患者排铜治疗是相对安全的。治疗患者的自然流产率明显低于未接受治疗的患者。使用铜螯合剂的致畸率较低。因此,妊娠期间应维持WD的治疗,并应密切监测患者的肝脏和神经症状。
《Jan Pfeiffenberger, Hepatology. 2018》
在欧洲的一项回顾性研究内发现,突变和临床的各项指标并无直接相关性,但患者中存在性别效应,女性肝脏表型常见,男性则神经表型更常见。在初诊时,成人表现出的肝硬化几率比青少年高。这些结论重新让人们认识了WD的发展进程及基因型表型关系。
《Ferenci P, Hepatology. 2018》
一、WTX101 二期试验
WTX101第二阶段报告中,每天一次WTX101 ,持续24周,可迅速降低NCC水平,并伴有神经系统状态改善,且无明显的药物诱导的临床恶化。该药物使用后肝功能稳定,具有良好的安全性。WTX101可直接去除细胞内多余的铜,并与循环中的铜和白蛋白形成惰性三方复合物,促进胆汁内铜排泄。
二、DPM1001的开发
近日,冷泉港与其衍生公司报告了一种新型铜高选择性螯合剂,称为DPM-1001。科学家们通过原代WD患者的成纤维细胞实验进行验证,它可以系统性的降低WD小鼠肝脏和脑内的铜。该药与既往临床用药相比,不仅给药剂量少,病理上有明显改变,还可避免部分铜异常积累的副作用。未来,这类药物有望成为新型优选药物。
三、其他疗法
生物聚合物。放射性64CuCl2溶液和共价结合8-羟基喹啉的聚合物能显著抑制胃肠道铜复合物的摄取,以微晶纤维素和壳聚糖为载体的化学改性生物高聚物载体有望作为威尔逊病的一种新型治疗方法 。
《M. Vetrik et al. Journal of Controlled Release ,2018》
A mini-ATP7B gene。已有实验验证,用AAV8编码人的ATP7B的基因治疗能够在6周大的雄性WD小鼠中提供长期铜代谢校正。最近,一项改良了的携带mini-atp7b基因的合成aavanc80在研究中表明,治疗小鼠一年后在预防肝损伤、恢复铜稳态和提高生存率方面同样有效。
《Oihana Murillo et al. Hepatology, 2019》
α-硫辛酸(LA)。在现有的多种螯合剂的基础上,通过各种结构-活性关系分析表明,内源性生物活性物质α-硫辛酸可能是一种潜在的去铜药物。该药能够在体外保护肝细胞免受铜的毒性,这进一步支持了其作为抗铜剂的潜力。
《Julia Smirnova et al. Scientific Reports,2018》
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