PBMC分离（25ml血）及后续

1.将血液混匀，与等体积1640培养基混合与50ml离心管中（留大约3ml血液放置4℃冰箱）

2.准备5只15毫升离心管，分别加入5mlPBMC分选液

3.小心地将血液-培养基缓慢、逐滴加入至15ml离心管中

4.2000r/min离心20min

5.取两只15ml离心管，加入10mlPBS，小心吸取4步骤中离心管中间白色层细胞，并加入PBS中，混匀

6.1800r/min离心5min，弃上清，10mlPBS重悬，10倍稀释计数。部分冻存。

7.取2个EP管，分别加入2.5*10^5个细胞，1800r/min离心5min。弃上清，加入200μlPBS重悬，其中一管避光加入CD1c抗体5μl，避光孵育20min。

8.1800r/min离心5min，弃上清，加200μlPBS重悬

9.（如果能立即流式细胞术检测，则可省略此步），加30μl多聚甲醛（4%多聚甲醛储存，最终体系需0.5%浓度的多聚甲醛）。

10.流式细胞术检测。

接第六步

取1个EP管，加入1*10^6细胞，1800r/min离心5min。弃上清，1mlTrizol混匀，立即冻存于-80℃冰箱。以备RNA抽提。