1.将血液混匀,与等体积1640培养基混合与50ml离心管中(留大约3ml血液放置4℃冰箱)
2.准备5只15毫升离心管,分别加入5mlPBMC分选液
3.小心地将血液-培养基缓慢、逐滴加入至15ml离心管中
4.2000r/min离心20min
5.取两只15ml离心管,加入10mlPBS,小心吸取4步骤中离心管中间白色层细胞,并加入PBS中,混匀
6.1800r/min离心5min,弃上清,10mlPBS重悬,10倍稀释计数。部分冻存。
7.取2个EP管,分别加入2.5*10^5个细胞,1800r/min离心5min。弃上清,加入200μlPBS重悬,其中一管避光加入CD1c抗体5μl,避光孵育20min。
8.1800r/min离心5min,弃上清,加200μlPBS重悬
9.(如果能立即流式细胞术检测,则可省略此步),加30μl多聚甲醛(4%多聚甲醛储存,最终体系需0.5%浓度的多聚甲醛)。
10.流式细胞术检测。
接第六步
取1个EP管,加入1*10^6细胞,1800r/min离心5min。弃上清,1mlTrizol混匀,立即冻存于-80℃冰箱。以备RNA抽提。
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