饲料酸价测定方法的研究与改进
李昊帮 张旭
湖南省畜牧兽医研究所
摘要：本试验对现有酸价测定方法进行改进，建立一种用于分析饲料及其原料酸价的方法。采用乙醚-乙醇混合液分次洗脱的方法将饲料样品中的油脂溶出，再用氢氧化钾标准溶液滴定， 计算得出酸价。该法具有简便、快速、准确的优点。
关键词：酸价；测定；饲料
酸价能够很好的反映饲料及原料的新鲜度（王春林，2003），是评定饲料品质的重要指标，也是关系到动物健康和畜产品品质的主要因素之一。油脂的酸价是指中和1 g 油脂中游离脂肪酸所需氢氧化钾的毫克数。对于固体饲料及原料来说，酸价是指中和1 g 或100 g 样品中游离脂肪酸所消耗氢氧化钾的毫克数。玉米、麦麸、鱼粉、肉骨粉等诸多饲料原料中都不同程度含有脂类物质，在储藏过程中，脂类物质在热、水分、氧、内源或外源脂肪酶作用下，易水解生成游离脂肪酸，也有部分过氧化物分解后再次氧化而生成游离脂肪酸（王肇慈，2000），游离脂肪酸的多少可以反映饲料的品质和新鲜度，因而，饲料企业需要对饲料及其原料的酸价进行检测。
目前，国家标准中并未对饲料中酸价的测定方法作出说明，分析者多参照GB/T 19164-2003鱼粉附录B 的方法，以及GB/T 5009.37-2003 食用植物油卫生标准的分析方法和SN/T 0803.8-1999 进出口油料游离脂肪酸、酸价检验方法中酸价的测定方法进行分析。但这些方法在测定饲料及其原料时都存在一些问题，GB/T 19164-2003采用中性乙醚-乙醇混合液摇匀静置，在摇匀时会有粉状样品挂在锥形瓶壁上无法被溶剂浸提，即使再洗涤一次也不能够把样品中的脂类物质全部洗出，使检测结果偏低；GB/T 5009.37-2003适用液态或固态的油脂，而饲料不能被溶剂溶解，直接滴定会影响终点判断，无法得到准确结果；SN/T 0803.8-1999 是用石油醚将样品中的油脂提取出来，回收石油醚后得到油样再按GB/T5009.37-2003 测定酸价，此方法操作繁琐、耗时长，需旋转蒸发仪，有些企业不具备检测条件，且在抽提和回收溶剂时油脂可能会因受热而增加油脂酸败产物，使检测结果偏高。
本研究针对现有标准存在的问题对方法加以改进，建立一种适于饲料及饲料原料中酸价测定的方法。
1· 材料与方法
1.1 试验材料
配合饲料，米糠、DDGS、鱼粉等饲料原料：国产，市售。
1.2 试剂
1.2.1 酚酞指示剂
称取1 g 酚酞， 用95%乙醇溶解， 定容至100 mL。
1.2.2 乙醚-乙醇混合液（体积比为2:1）滴入几滴酚酞指示剂，临用前用0.1mol/L 氢氧化钾溶液滴至中性。
1.2.3 0.1 mol/L 氢氧化钾标准溶液（需标定）
1.3 研究方法
1.3.1 饲料中油脂浸出方法的比较
方法一：称取3 g 左右试样，置于具塞锥形瓶中，加入1.2.2 乙醚-乙醇混合液50 mL，摇匀后静置30 min， 滤渣用30 mL 乙醚-乙醇混合液洗2 次， 滤液合并后加入1.2.1 酚酞指示剂3 滴，用1.2.3 氢氧化钾标准溶液滴定至微红色30 s 不褪色为终点，记录消耗碱液体积，根据1.4 公式计算结果。
方法二：称取3 g 左右试样，置于带滤纸的漏斗内，漏斗底端用一小块脱脂棉塞住，放于锥形瓶上，加入1.2.2 乙醚-乙醇混合液浸泡，漏斗上面加盖，30min 后取下脱脂棉放入锥形瓶中，用乙醚-乙醇混合液分数次洗脱样品（约6 次），每次需等上次溶剂完全滤净，洗脱完毕向滤液中加入
1.2.1 酚酞指示剂3 滴， 用1.2.3 氢氧化钾标准溶液滴定并计算结果。
1.3.2 乙醚-乙醇混合液用量的研究比较
使用体积比为2:1 的乙醚-乙醇混合液，分别用60、70、80、90 和100 mL 混合液先浸泡后洗脱，洗涤次数分别为4、5、6、7 和8 次，按照1.3.1中方法二操作进行。测定同一样品，每种溶剂做3个平行样。
1.3.3 粒度大小对测定结果的影响
将同一样品粉碎后分别过40 目和60 目筛，按1.3.1 中方法二操作进行。
1.4 结果计算
X：样品的酸价，每克样品所消耗氢氧化钾的毫克数，mg/g；
V：样品消耗氢氧化钾标准溶液体积，mL；
C：氢氧化钾标准溶液浓度，mol/L；
M：样品质量，g；
56.11：氢氧化钾摩尔质量，g/mol。
1.5 数据统计分析
试验结果以平均值± 标准差表示， 采用SPSS19.0 统计软件作独立样本t 检验， 显著水平为P<0.05。
2· 结果
2.1 饲料中油脂浸出方法的比较
方法一和方法二测得的酸价分别为1.24±0.18 和1.63±0.05（P＜0.05），两种方法检测结果差异显著。方法二测得的酸价高于方法一，标准差低于方法一，方法二优于方法一。
2.2 乙醚-乙醇混合液用量的研究比较
分析结果见图1，使用乙醚-乙醇混合液分次洗脱时，混合溶剂用量低于80 mL 时，随着溶剂用量的增加，酸价测定值呈上升趋势；高于80 mL后，测得的酸价数值很接近，因而80 mL 是最适宜的溶剂使用量，浸泡后洗脱次数为6 次。
2.3 粒度大小对测定结果的影响
对不同粒度的饲料进行分析发现，同一样品粉碎后过40 目和60 目筛的酸价测定结果分别为4.25±0.11 和4.55±0.12（P＜0.05），样品粒度越小，其中的油脂越易被洗脱出来，因而建议将饲料样品粉碎过60 目筛后用于测定。
3· 讨论
3.1 饲料及原料中酸价测定方法的研究
采用先浸泡再洗脱的方法， 将样品置于装有滤纸（慢速滤纸）的漏斗内，开始时漏斗底部用脱脂棉塞住，使溶剂过滤速度大大减慢，样品在一段时间内处于被溶剂浸泡的状态，之后取下脱脂棉，分若干次加入混合溶剂进行洗脱，油脂彻底去除。以往测定酸价的方法中并没有对样品粒度做出说明，本研究发现，样品粉碎粒度对酸价分析结果也有显著影响，若粒度大，则样品中的油脂难于浸提出来；粒度小的样品测定酸价更为准确，因而，用于测定酸价的饲料及原料宜粉碎且过60 目筛。
乙醚和乙醇体积比为2:1 时的浸提速度和浸提效果最好， 乙醚-乙醇混合溶剂用量对酸价测定结果也有影响，溶剂过少则不能够把样品中的油脂全部浸洗出来，使酸价测定值偏低；溶剂过多则造成浪费，通过试验得出使用溶剂量不宜少于80 mL，浸泡1 次，洗涤6 次，若样品油脂含量较高，可适当增加溶剂用量和洗涤次数。
本研究得到的酸价测定方法对以往方法存在的弊端加以改进，使测定结果更加准确，对饲料生产和产品及原料检验有重要的指导作用和现实意义。
3.2 测定饲料中酸价的注意事项
（1）选取有代表性样品，粉碎后立即测定，如放置过久或贮藏不当，会造成样品中油脂氧化酸败，使酸价升高，若不能立即测定，应密封后置于冰箱中，但不宜存放过久。
（2） 饲料样品不宜在烘箱中除去水分后测定，因为加热会增加酸败产物，若饲料样品水分较多应做低温风干处理。脂肪含量高的样品宜少量称取，以便将样品中脂肪洗脱干净。
（3） 盛装中性乙醚-乙醇混合液的容器要加盖，洗脱过程中，漏斗上方亦需加盖或用保鲜膜盖住，减少空气中CO2进入而使混合液变性。
（4）洗涤样品时，要沿滤纸边缘向下洗，使样品集中于滤纸中心，每次添加溶剂量不得超过漏斗体积2/3。
（5）试验最好在通风橱中进行，以免试验者吸入过多乙醚对身体造成毒害。测定后宜对混合液进行回收，以减少污染，节约溶剂。
（6）滴定时可采用氢氧化钠代替氢氧化钾。
4 ·结论
通过对现有酸价测定方法进行改进，研究得到一种准确测定饲料及饲料原料中酸价的方法。
（参考文献：略） | 
