双孢蘑菇菌种国家标准
1 范围
本标准规定了双孢蘑菇(Agaricus bisporus)菌种的质量要求、试验方法、检验规则及标签、标志、包装、贮运等。本标准适用于双孢蘑菇(Agaricus bisporus)的生产、流通和使用。
2 引用标准
下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。在本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB191-1990 包装储运图示标准
GB4789.28-1994 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂
GB9687-1988 食品包装用聚乙烯成型品卫生标准
GB9688-1988 食品包装用聚丙烯成型品卫生标准
GB/T12728-1991 食用菌术语
3 定义
本标准采用下列定义。
3.1 母种 stock culture
经各种方法分离、选育或杂交得到的具有出菇能力的菌丝体纯培养物及其继代培养物。
3.2 原种 pre-culture spawn
由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。栽培种 spawn由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。
3.4 拮抗现象 antagonism
具有不同遗传基因的菌落间产生不生长区带或形成不同形式线形边缘的现象。
3.5 无棉塑料盖 plastic stop
可代替塑料盖,带有某种高分子或纤维材料可满足滤菌和透气要求的塑料盖。
3.6 玻璃菌种瓶 glass spawn bottle
圆柱形,容积750mL,耐126℃高温,无色、淡绿色或淡兰色的透明玻璃瓶。瓶体总高190mm±2mm,瓶颈高25mm±1mm,瓶口外径40mm±1mm,瓶体外径82mm±1mm。
3.7 塑料菌种瓶 polypropylene spawn bottle
圆柱形,容积850mL,耐126℃高温,白色、半透明,卫生标准符合GB9688规定的塑料瓶。瓶体总高165mm±2mm,瓶颈高28mm±1mm,瓶口外径63mm±1mm,瓶体外径90mm±1mm。
3.8 角变 sector
因菌丝体局部变异或感染病毒而导致菌丝变细、生长缓慢、菌丝体表面特征成角状异常的现象。
3.9 高温抑制线 high temperatured line
食用菌菌种在生长过程中受高温的不良影响,培养物出现的圈状发黄、发暗或菌丝变稀弱的现象。
3.10 同工酶 isoenzyme
催化相同生化反应,而结构及理化性质不同的酶分子。通过凝胶电泳使同工酶分离成迁移率不同的区带,经生物化学染色后显示出的同工酶谱,可对生物品种进行酶分子水平的鉴别或鉴定。
4 质量要求
4.1母种
表1
项目要求
棉塞或无棉塑料盖干燥、洁净、松紧适度,能满足透气和滤菌要求
培养基灌入量 为试管总体积的十分之一至五分之一
培养基斜面长度为试管总长度的二分之一至五分之一
斜面接种块大小 3~5mmX3~5mm
培养基斜面 正面外观
菌丝体特征 洁白或米白、浓密、羽毛状或叶脉状
菌丝体表面 均匀、平整、无角变
菌丝分泌物 无
菌落边缘整齐,无膏状、蜡状细菌或酵母菌菌落及霉菌菌落
培养基斜面背面外观 培养基不干缩,颜色均匀、无暗斑、无色素
培养物气味有双孢蘑菇菌种特有的香味,无酸、臭、霉等异味
培养物镜检 菌丝粗壮,无杂菌菌丝及孢子,无虫及虫卵。
4.2 原种
表2
项目 要求
棉塞或无棉塑料盖 干燥、洁净、松紧适度,能满足透气和滤菌要求
培养基上表面距瓶口的距离 50 mm±5mm
接种量 每支母种接原种 4-6瓶
菌种瓶外观
菌丝体特征 洁白浓密、生长旺健
培养物表面菌丝体生长均匀,无角变,无高温抑制线
培养基及菌丝体紧贴瓶壁,无干缩
培养物表面分泌物 无
各种杂菌孢子、菌丝 无
拮抗现象 无
培养物气味 有蘑菇菌种特有的香味,无酸、臭、霉等异味
培养物镜检 菌丝粗壮、无杂菌菌丝和孢子、无虫及虫卵
4.3 栽培种
表3
项目要求
棉塞或无棉塑料盖 干燥、洁净、松紧适度,能满足透气和滤菌要求
培养基面距瓶(袋)口的距离 50 mm±5mm
接种量 每瓶原种接栽培种 30-50瓶(袋)
菌种瓶(袋) 外观
菌丝体特征 洁白浓密、生长旺健
不同部位菌丝体 生长均匀,无角变,无高温抑制线
培养基及菌丝体 紧贴瓶(袋)壁,无干缩
培养物表面分泌物 无
各种杂菌孢子、菌丝 无
拮抗现象 无
培养物气味 有蘑菇菌种特有的香味,无酸、臭、霉等异味
培养物镜检 菌丝粗壮、无杂菌菌丝和孢子、无虫及虫卵
5 抽样
5.1质检部门的抽样应具有代表性。
5.2母种按品种、培养条件、接种时间分批编号,原种、栽培种按菌种来源、制种方法和接种时间分批编号。按批随机抽取被检样品。
5.3母种、原种、栽培种的抽样量分别为该批菌种量的10%,5%,1%。但每批抽样数量不得少于10支、瓶(袋);超过100支、瓶(袋)的,可进行两级抽样。
6 试验方法
6.1 感官检验
6.2细菌检验
取少量疑有细菌污染的培养物,按无菌操作接入GB4789.28中4.8规定的营养肉汤培养液中,25℃-28℃振荡培养1-2天,观察培养液是否混浊。培养液混浊,为有细菌污染;培养液澄清,为无细菌污染。
6.3母种遗传和栽培性状检验
取菌龄为15-20天的试管母种, 刮取菌丝, 按1:3:0.5的比例混合菌丝(g)、0.1Mol/L磷酸缓冲液(mL)和石英砂(g), 研磨成匀浆, 台式离心机10000r/min离心5min, 取上清液, 按5:1:1的比例混合上清液、40%蔗糖和0.01%溴酚蓝溶液作为电泳样品, 4℃下冷藏备用。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳。用pH8.9Tris-HCl缓冲液配制9%分离胶,用pH8.3Tris-甘氨酸作电极缓冲液。点样75uL, 3℃下120V电泳20min后稳压200V, 4h。用固蓝RR盐60mg,0.1Mol/L磷酸缓冲液(pH6.0) 80mL α-萘乙酯38mg和β-萘乙酯38mg溶于3mL丙酮配制的染色液染色,显现酶谱,再根据特征带分型。
将被检母种制成原种。采用
表4
检验项目 检验结果 检验项目 检验结果
母种发满所需时间,天
转潮间隔时间,天
原种发满所需时间,天
总产,Kg
栽培种发满所需时间,天
平均单产,Kg
菌种萌发所需时间,天
平均单菇重,g
菌丝发满培养基所需时间,天
生物学效率,%
覆土至扭结所需时间,天
菇型、色泽
覆土至采菇所需时间,天
菇盖直径、厚度、柄长、柄的直径,mm
6.4留样
各级菌种要留样备查,留样的数量应每个批号母种3-5支,原种和栽培种5-7瓶,于4℃-6℃下贮存,母种5个月,原种4个月,栽培种2个月。
7 检验规则
7.1判定规则按质量要求进行。检验项目全部符合质量要求时,为合格菌种,其中任何一项不符合要求,均为不合格菌种。
8 标志、包装、运输、贮存
8.1标志
a. 产品名称(双孢蘑菇母种)
b. 品种名称(As2796)
c. 生产单位(xxx菌种厂)
d. 接种日期(2000.xx.xx)
a. 产品名称、品种名称
b. 厂名、厂址、联系电话
c. 出厂日期
d. 保质期、贮存条件、执行标准
e. 发货单位
f.收货单位
g. 数量
h. 毛重、净重
i. 执行标准
a. 小心轻放标志
b.防水防潮防冻标志
c.防晒防高温标志
d.防止倒置标志
e.防止重压标志
8.2 包装
8.3 运输
8.4 贮存
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