实验发现,DKK3(dickkopf-related protein 3) 作为抑癌基因通过阻滞细胞周期和诱导凋亡以及影响细胞周期和凋亡的相关蛋白表达抑制人恶性黑素瘤(简称恶黑)的进程,而DKK3在转移性恶黑中的表达及与临床特征的关系尚不清楚,DKK3能否作为功能性抑癌基因抑制恶黑细胞迁移和侵袭尚不清楚。李晶等通过验证DKK3对人皮肤恶黑细胞迁移和侵袭的作用及机制,探讨皮肤恶黑的转移相关分子机制。
抑癌基因DKK3过表达抑制人皮肤黑素瘤细胞迁移和侵袭的机制探讨
李晶 余音 陈静 张欣 刘冬阳 黎智 刁庆春 刘素桃 金晶 王灿
作者单位:重庆市中医院皮肤科(李晶、余音、刘冬阳、黎智、刁庆春、刘素桃);重庆大学附属肿瘤医院 重庆市肿瘤研究所 重庆市肿瘤医院放疗科(陈静、张欣、王灿);湖北省荆门市第二人民医院手术室(金晶)
通过Western印迹法分析DKK3在人黑素瘤细胞系(HM、A375、WM451、SK-MEL-01、Hs-695T、MDA-MB-435s、WM35)及色素痣细胞中的表达,实时荧光定量PCR检测2014 年8月至2017年6月在重庆市中医院皮肤科收集的58例恶性黑素瘤(包括原发性黑素瘤与转移性黑素瘤)和30例色素痣组织中DKK3 mRNA的相对表达水平。分别转染pcDNA3.1(+)-Flag-Vector质粒(对照组)和pcDNA3.1(+)-Flag-DKK3 质粒(转染组)至恶性黑素瘤 A375 细胞中,通过实时荧光定量PCR和Western印迹法验证 DKK3 的过表达,及DKK3过表达对黑素瘤细胞迁移和侵袭相关的分子表达水平的影响;通过细胞平板划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验分析DKK3对A375细胞迁移及侵袭的影响。
DKK3在人黑素瘤细胞系中的表达 DKK3蛋白在人黑素瘤细胞系中表达缺失或低表达,在色素痣细胞中高表达。1:HM; 2:A375; 3:WM451; 4:SK-MEL-1; 5:Hs-695T; 6:MDA-MB-435s; 7:WM35; 8、9:色素痣
DKK3蛋白在人黑素瘤细胞系中表达缺失或低表达,在色素痣组织中高表达。原发性黑素瘤、转移性黑素瘤与色素痣中DKK3 mRNA表达水平分别为(0. 325 ± 0.150) × 10⁃3、(0. 142 ± 0.210) × 10⁃3、(0. 634 ± 0.120) × 10⁃3,差异有统计学意义(F = 46.57,P < 0.05),转移性黑素瘤表达水平低于原发性黑素瘤和色素痣 (均P < 0.05)。A375 细胞转染DKK3后,细胞划痕迁移率(22.11% ± 5.11%)低于对照组(54.36% ± 23.22%)(P < 0.001);迁移及侵袭实验中,转染组穿出小室细胞数(265 ± 33、76 ± 18)低于对照组(429 ± 41、135 ± 21),差异有统计学意义(均P < 0.001)。转染组A375细胞过表达DKK3后,上皮钙黏着蛋白和mRNA表达上升,神经钙黏着蛋白、波形蛋白、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP7、MMP11蛋白和mRNA的表达下降。
DKK3 mRNA在人皮肤黑素瘤及色素痣组织中的表达 两两组间比较,均P < 0.001
DKK3在黑素瘤细胞系和组织中表达下调,DKK3过表达后A375 细胞的迁移和侵袭受到明显抑制,DKK3可能是抑制皮肤恶性黑素瘤转移的靶点。
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