脱水
75%酒精 2分钟
85%酒精 2分钟
95%酒精I 5分钟
95%酒精II 5分钟
100%酒精I 5分钟
100%酒精II 5分钟
用梯度酒精脱水时,在低浓度酒精中时间不宜过长,到高浓度时逐步延长脱水时间。以免脱水不彻底,影响二甲苯透明的效果。
透明
二甲苯I 5分钟
二甲苯II 5分钟
封片
将载玻片从二甲苯中吸出后,吸去多余的二甲苯,在标本上的二甲苯尚未干透之前加一滴中性树胶,取盖玻片从一端逐步盖下去,避免产生气泡,也不得拖动盖玻片,以免将标本破坏。树胶量视盖玻片大小而定,勿使过多过少。
封片时要做到:切片从二甲苯取出后,不使切片干涸。如果干涸,由于空气潮湿,封片时就保证不了切片的无水。如果切片上保留着一定量的二甲苯,二甲苯的特性不溶于水,它的存在使切片与空气隔开,切片无法跟潮湿空气接触,就可保证切片的无水,这时及时滴上中性树胶,切片就能完好地封好。
封片用的中性树胶,不能过稠,也不能过稀,过稠胶难以伸展开,并容易产生气泡,影响封片的速度。过稀是因胶中含过多的二甲苯,封完切片后,胶一收缩及二甲苯挥发,切片就不能被完全封盖上,这都影响切片的质量。
中性树胶可能有些缺点,它是以二甲苯为溶剂的,封合后容易挥发很慢,我制作的玻片起码在通风处晾一两个月才没有二甲苯的味道。可能在烈日下暴晒会快点。
封合方法很简单,在一块镜片中央滴2-3滴树胶液(注意要滴在一起否则容易有气泡),然后把另一块镜片慢慢放上去,轻轻挤压,树胶液会向外侧扩散至整个镜片,通风晾几个小时后用棉球粘上二甲苯或者松节油把镜片边缘多余的树胶擦洗干净。然后再放在通风处晾2个月。
结果
细胞核被染成深蓝黑色;细胞浆被染成粉红色;软骨及钙盐被染成蓝色;胶原纤维染成淡粉红色,嗜酸性细胞及嗜酸性颗粒呈鲜红色;弹力纤维呈淡粉红色;某些蛋白性物呈粉红色等。
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