SD
鼠颈椎
脱臼法处死,75%
乙醇浸泡1~2分钟,2次,置超净台内,打开腹腔取出
肾脏剪碎,置含Hank’s液的无菌培养皿洗涤,置80目不锈钢筛网上
用扁平自制小铲轻轻碾磨产物微小
组织透过筛网,滤过组织Hank’s液
混合物用吸管吸至120目不锈钢筛网,滤过,去小组织块,滤过物吸至200目不锈钢筛网,轻轻滤过,Hank’s液洗涤1次,收集网上肾
小球,镜下观察
分离良好的肾小球。肾小球用0.2%
胰酶、0.1%
胶原酶,37℃
消化20分钟,加
血清终止胰酶
反应,离心除去
胶原酶。处理过的肾小球计
后接
至24孔培养板或25ml培养瓶,使肾小球大于60
/cm
2,加
培养基5~10ml(培养基组成:F12—3T3上清1:1;5%马血清;2.5%胎
牛血清;
胰岛素5μg/ml;25ng/ml
氢化可的松;5μg/ml
转铁蛋白;25ng/ml
列腺素E1;
甲状腺素0.02ng/ml;D-
缬氨酸150ng/ml)肾小球培养8~10天,去除肾小球未
生长组分,
细胞继续培养24小时,
形态学观察:细胞生长成单层
角型细胞,直径约100μm。
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