CK19、gal

【摘要】  　　 目的 探讨甲状腺乳头状癌中CK19、galectin-3、HBME-1和Ret的表达及其在病理诊断中的价值。方法 分别采用免疫组织化学Envision法及LSAB法检测CK19、galectin-3、HBME-1和Ret在70例甲状腺乳头状癌、15例结节性甲状腺肿和40例癌旁正常滤泡中的表达。结果 CK19、galectin-3、HBME-1和Ret在乳头状癌组织的阳性率为100%（70/70）、97.2%(68/70)、94.3%（66/70）和88.6%（62/70），均有统计学意义（P<0.01）。结论 CK19、galectin-3、HBME-1和Ret在甲状腺乳头状癌中表达增加，在病理诊断中有一定价值。

【关键词】  甲状腺肿瘤 乳头状癌 滤泡 角蛋白

　　　【Abstract】  Objective  To study the expression of cytokeratins19(CK19)、galectin-3(gal-3)、HBME-1 and Ret in thyroid papillary carcinoma (TPC) and their diagnostic value. Methods  70 cases of TPC (40 cases with adjacent normal thyroid tissus) and 15 cases of nodular goiter with papillary hyperplasea were enrolled into the study. immunohistochemical staining for CK19, gal-3, HBME-1 and Ret was performed in all cases using EnVision and LSAB methods respectively. Results  The positive rates for CK19, gal-3, HBME-1 and Ret in TPCs were 100%(70/70)、97.7%(68/70)、94.3%(66/70) and 88.6%(62/70), the differences were statistically significant(P<0.01). Conclusion  CK19, Gal-3, HBME-1 and Ret expressions are significantly higher in TPCs than those in benign thyroid tissue, which has certain diagnostic value.

　　【Key words】  Thyroid neoplasms  Carcinoma  papillary  Follicular  Keratin   

　　甲状腺乳头状癌是最常见的甲状腺恶性肿癌。典型的甲状腺乳头状癌以其典型乳头状结构和特征性的细胞核形态，包括毛玻璃核、核沟、核内胞质包涵体等特点而易做出诊断［１］，但是在日常工作中时常会遇到不典型的病例，而结节性甲状腺肿囊性变时常伴有乳头状增生，给确定诊断带来困难。已有报道，CK19、gal-3、HBME-1和Ret等免疫组织化学可以帮助鉴别诊断［２，３］。作者对一组甲状腺乳头状癌及相关病变进行CK19、gal-3、HBME-1和Ret的免疫组织化学分析，以探讨这些标记在甲状腺乳头状癌诊断和鉴别诊断中的作用。

　　1  材料及方法
   
　　收集上海瑞金医院病理科存档2001年至2002年甲状腺乳头状癌病例70例，并以同时期结节性甲状腺肿伴乳头状增生15例作为对照。70例甲状腺乳头状癌列为乳头状癌组，40例癌旁正常滤泡和15例结节性甲状腺肿列为良性病例组。所有标本均为手术或活检标本，经4%甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋、切片、HE染色，观察其光镜下组织学形态，并做CK19、gal-3、HBME-1和Ret免疫组织化学染色。CK19、gal-3、HBME-1和Ret抗体为DaKo公司产品，采用Envision二步法显色系统，CK19、gal-3及HBME-1的抗体浓度各为1:50、1：80、1：80。Ret抗体为Novocastra公司，采用LSAB三步显色系统，抗体浓度为1：50。CK19、galectin-3、HBME-1和Ret均为胞质着色。结果判断：4种染色均以细胞质内出现棕黄色细颗粒为阳性，gal-3部分有细胞核着色，HBME-1可有明显胞膜着色；＋为10%～25%阳性细胞；为25%～50%阳性细胞；为50%～75%阳性细胞；为75%～100%阳性细胞，其中＋和为弱阳性，和为强阳性；阴性病例（一）：无或＜10%阳性细胞。

　　2  结果
   
　　70例甲状腺乳头状癌中18例主要由滤泡性结构组成，归为滤泡型乳头状癌，其中6例仅见滤泡状结构，未见明显乳头，其余52例为经典型乳头状癌。滤泡型乳头状癌的病变中，以中、小滤泡为主，细胞核都有明显改变，都可以看到毛玻璃样核及核沟（图1），核内胞质包涵体则多少不等，有些病例不能见到，经典乳头状癌的乳头较为纤细，有明确的纤维血管轴心，有复杂的分支（图2）。15例结节性甲状腺肿的病例中，滤泡大小不等，以较大滤泡为主，各例都有囊性变，囊内可见乳头状结构，乳头较为粗大，没有多级分支，多数乳头间为胶质，也有灶性纤维组织，含小血管（图3），表面上皮矮立方状，未见毛玻璃状核，核沟及核内胞质包涵体。40例癌旁周围可以看到较正常滤泡，滤泡中等大小，滤泡上皮单层矮立方，内含胶质。
   
　　CK19、gal-3、HBME-1、Ret染色结果见表1。CK19染色100%(70/70)乳头状癌染色阳性，同时仅有10/15结节性甲状腺肿和10/40正常滤泡有阳性染色，其中92.9%（65/70）乳头状癌染色强阳性（>50%，图4），而结节性甲状腺肿和正常滤泡未见到强阳性反应；gal-3染色97.2%(68/70)乳头状癌染色阳性（图5），11/15结节性甲状腺肿染色阴性（图6），而40例正常滤泡有1例弱阳性；HBME-1的染色94.3%（66/70）乳头状癌阳性（图7），5/15结节性甲状腺肿染色阳性，而40例正常滤泡有2例阳性；Ret的染色88.6%（62/70）乳头状癌阳性（图8），5/15结节性甲状腺肿染色阳性，而40例正常滤泡有2例阳性。

　　图1  滤泡型乳头状癌主要由滤泡状结构组成，细胞核染色质细呈毛玻璃状HE×40；（略）

　　图2  乳头状癌中见分支复杂的乳头状结构，有纤细的纤维血管轴心HE×40；（略）

　　图3  结节性甲状腺肿伴乳头状增生，乳头较粗大，轴心间质少，有时含胶质HE×40；（略）

　　图4  乳头状癌CK19阳性表达 Envision法×100；（略）

　　图5  乳头状癌gal-3阳性表达 Envision法×100；（略）

　　图6  结节性甲状腺肿增生结节 gal-3阴性表达Envision法×200；（略）

　　图7  乳头状癌HBME-1阳性表达Envision法×100；（略）

　　图8  乳头状癌Ret阳性表达LSAB法×100。（略）

　　表1  不同甲状腺组织免疫组织化学染色结果（略）

　　注:乳头状癌组CK19阳性率高于良性病变组,χ2值61.869,P<0.01;**乳头状癌组gal-3阳性率高于良性病变组,χ2值98.293,P<0.01;***乳头状癌组HBME-1阳性率高于良性病变组,χ2值87.670,P<0.01;****乳头状癌组Ret阳性率高于良性病变组,χ2值71.644,P<0.01。

　　3  讨论
   
　　CK19是用于甲状腺乳头状癌鉴别诊断的一种相对分子量低的角蛋白，Miettinen等［４］认为CK19可区别乳头状癌和乳头状增生，Baloch等［５］认为对滤泡型乳头状癌和其他滤泡性病变亦有鉴别意义，本研究发现在甲状腺良性病变中CK19多为阴性或弱阳性，即使甲状腺乳头状增生结节亦为阴性或弱阳性，而乳头状癌不论经典型还是滤泡型基本都是强阳性表达，在癌周围组织中一些散在浸润腺体亦为明显阳性，而不同于背景组织，提示CK19阳性表达是滤泡增生恶变的重要标志，不但可作为甲状腺良、恶性病变，尤其是乳头状癌诊断的重要依据，而且可以提示一些恶性病变倾向，防止漏诊。
   
　　gal-3是β-半乳糖苷结合蛋白，较多认为正常甲状腺及结节性甲状腺肿等良性病变gal-3不表达［６］，而乳头状癌几乎均为gal-3阳性，本研究发现在结节性甲状腺肿正常滤泡中gal-3阳性表达仅为26.7%和2.5%，并且均为弱阳性，表明gal-3的表达情况对鉴别诊断有较好的参考价值。
   
　　HBME-1是目前临床上应用的间皮瘤相关抗体，这种抗体在大多数上皮型间皮瘤中呈强阳性细胞膜表达，是新近在用于甲状腺病理诊断中的一种抗体，报道尚少，有学者认为HBME-1是甲状腺乳头状癌较好的标记［７］，并可用于淋巴结中良性甲状腺组织与转移性乳头状癌的识别［８］，Cheung等［３］报道HBME-1在结节性甲状腺肿中均阴性，本研究亦发现在结节性甲状腺肿和正常滤泡中HBME-1阳性表达率为33.4%和2.5%，并且均为弱阳性，在乳头状癌中的阳性表达率为94.3%，故HBME-1不但是甲状腺乳头状癌较好的标记，而且对良、恶性鉴别诊断亦有帮助。
   
　　Ret原癌基因位于10q11.2编码，为一种酪氨酸激酶受体，甲状腺乳头状癌细胞表达Ret，但在正常甲状腺滤泡上皮中不表达，因此可将Ret作为较特异的诊断指标，但阴性表达并不能排除乳头状癌［３］。本组乳头状癌中，Ret染色阳性率高于结节性甲状腺肿或正常滤泡，提示Ret表达明显增加可以作为乳头状癌辅助诊断的指标，但也不是完全特异的诊断标记［３］。
   
　　综上所述，在甲状腺乳头状癌的病理诊断中，CK19、galectin-3、HBME-1和Ret表达具有一定的特异性，特别是在一些不典型的病例中，免疫组织化学染色可对诊断做出帮助。本研究还发现CK19、gal-3、HBME-1和Ret联合检测对甲状腺病变的鉴别诊断作用明显增强，故CK19、gal-3、HBME-1和Ret的联合检测对甲状腺病变的诊断、鉴别诊断具有较高的实用价值。

【参考文献】
  　　1 Rosai J, Zampi G, Carcangiu ML. Papillary carcinoma of the thyroid a discussion of its several morphologic expressions with particular emphasis on the follicular variant. Am J Surg Pathol,1983,7: 809～817.

　　2 Liberman E, Weidner N. Papillary and follicular neoplasms of the thyroid gland. Differential immunohistochemical staining with highmolecular-weight keratin and involucrin. Appl Immunohistochem Molecul Morphol, 2000,8:42～48.

　　3 Cheung CC, Ezzat S, Freeman JL, et al. Immunohistochemical diagnosis of papillary thyroid carcinoma. Mod Pathol,2001,14:338～342.

　　4 Miettinen M, Kovatich AJ,Karkkainen P. Keratin subsets in papillary and follicular thyroid lesions: A paraffin section analysis with diagnosis implications. Vichows Arch,1997,431:407～413.

　　5 Baloch ZW, Abraham S, Roberts S, et al. Differential expression of cytokeratins in follicular variant papillary carcinoma; an imunohistochemical study and its diagnostic utility. Hum Pathol,1999,30:1166～1171.

　　6 Inohara H, Honjo Y, Yoshii T, et al. Expression of galectin-3 in fine needle aspirates as a marker differentiating benign from malignant thyroid neoplasms. Cancer,1999,85:2475～2481.

　　7 Van-Hoeven KH, Kovatich AJ, Miettinen M. Immunocytochemical evaluation of HBME-1,CA19-9, and CD-15（Leu-M1）in fine needle aspirates of thyroid nodules. Diagn Cytopathol, 1998,18:93～97.

　　8 Hirokawa M, Horiguchi H, Wakatsuki S,et al. Intranodal benign thyroid tissue; significance of HBME-1 in differentiation from metastatic papillary thyroid carcinoma. APMIS,2001,109:875～880.