【基础研究】GATA4基因对心内膜垫发育中相关蛋白表达作用的实验研究

目的

研究GATA4基因在心内膜垫发育过程中的作用。

方法

构建GATA4野生型和突变型真核表达载体，利用脂质体Lipofectamine 2000介导重组质粒转染Hela细胞，分为Hela组、Hela^GATA4组、Hela^H436Y组、Hela^Null组，应用实时PCR和Western blot检测转录因子GATA4、Sox9和Scleraxis及细胞外基质Aggrecan、Tenascin的mRNA和蛋白相对表达水平变化。

结果

Hela^GATA4组、Hela^H436Y组、Hela^Null组和Hela组GATA4基因mRNA相对表达水平分别为310.83±2.39、146.35±1.74、0.94±0.32和1.00±0.28(F＝72.508，P<0.05)，且Hela^GATA4组、Hela^H436Y组均分别高于Hela^Null组和Hela组(P均<0.05)，Hela^H436Y组低于Hela^GATA4组(P<0.05)；GATA4蛋白表达水平与mRNA变化一致。Hela^GATA4组及Hela^H436Y组Sox9、Scleraxis、Aggrecan、Tenascin基因的mRNA和蛋白表达水平明显高于Hela组(P均<0.05)，但它们在Hela^H436Y组的表达水平低于Hela^GATA4组(P均<0.05)。

结论

GATA4－H436Y突变使GATA4基因转录活性降低从而对下游基因的转录激活作用减弱，为阐明GATA4基因在心内膜垫发育成瓣膜中的作用提供了一定的理论基础。

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