作者：邹玺， 刘宝瑞， 钱晓萍， 禹立霞
【关键词】 土鳖虫；,,BGC
摘要：目的研究土鳖虫体外对人胃低分化腺癌BGC823细胞抗肿瘤活性。方法采用MTT法测定了土鳖虫水提物和醇提物对人胃低分化腺癌BGC823细胞增殖的抑制作用，采用生长曲线测定法检测土鳖虫醇提物对体外培养肿瘤细胞的细胞毒作用。结果土鳖虫水提物不能抑制体外培养的肿瘤细胞，而醇提物能显著抑制人胃低分化腺癌BGC823细胞增殖,药物作用48h时抑制率最高，并有较好的剂量依赖关系。结论体外土鳖虫水提物没有抗肿瘤活性，醇提物有较强的抗肿瘤作用，值得进一步研究其抑制机理。
关键词：土鳖虫； BGC823细胞株； 抗肿瘤活性
《中国药典》收载土鳖虫正品药材为鳖蠊科昆虫地鳖Eupolyphaga sinensis Walker或冀地鳖Steleophage plancyi (Boleny)的雌虫干燥体，性寒，味咸，有小毒。目前治疗消化道肿瘤的中医处方中土鳖虫的应用非常广泛，大多入中药复方煎取，认为其有抗肿瘤活性。然而，土鳖虫的抗肿瘤作用及其抗肿瘤成分未见有明确的实验室研究报道。笔者对此进行了研究。
1 材料与方法
1.1 材料来源 实验细胞株：人胃低分化腺癌BGC823细胞株为本实验室常规培养，生长于含10%新生牛血清的RPMI1640完全培养液中，37℃恒温，5%CO2，饱和湿度培养箱中生长。取对数生长期细胞用于实验。土鳖虫：购自六安市国泰药业有限责任公司，批号：20041201试剂：RPMI1640培养液(GIBCO公司产品)；MTT(sigma公司产品，以超纯水配制成5 mg/ml浓度)；二甲基亚砜（DMSO，上海凌峰公司产品，分析纯）。
1.2 药物制备
1.2.1 水提物的制备称取药材100 g，以水为溶媒提取两次。第1次加10倍量水，加热提取1 h，滤过；药渣加8倍量水，加热提取1 h，滤过。合并两次滤液，浓缩至1 g/ml（相当于生药），定容。0.22 μm微孔滤膜过滤，备用。
1.2.2 醇提物的制备称取药材300 g，以95%乙醇为溶媒提取两次。第1次加8倍量溶媒，加热提取1 h，滤过；药渣加8倍量溶媒，加热提取1 h，滤过。合并两次滤液，浓缩至1 g/ml（相当于生药），定容。0.22 μm微孔滤膜过滤，备用。
1.2.3 配药将上药用完全培养液稀释后得4种终浓度：10，5 ，2.5，1.25 mg/ml供实验用。将醇提液原液以完全培养液稀释为8，7.5 ，6，5 ，4 ，3 ，2，1 mg/ml供实验用。以上药物均实验前新鲜配用。
1.3 方法与步骤
1.3.1 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)显色法［1，2］在含10%胎牛血清的1640培养液中培养细胞，在细胞达到指数增长期时用于实验。记数细胞浓度为2.5×104/ml，接种于无菌的96孔培养板中。每孔加入肿瘤细胞悬液200 μl，培养24 h后吸去原有的培养液，分别加入各200 μl的4种不同浓度土鳖虫醇提液和6种不同浓度水提液，设空白对照孔加完全培养液，实验对照孔加肿瘤细胞，每组均为5复孔。混匀后置于37℃、5%CO2培养箱中继续培养24 h。于结束前4 h每孔加入20 μl浓度为5 mg/ml MTT，继续培养4 h后吸去全部上清液，每孔加入二甲基亚砜200 μl溶解液，微型混合器振荡10～15 min，充分溶解，用酶联免疫检测仪于490/620 nm波长处测定光密度OD值，按抑制率计算公式计算抑制胃癌细胞的百分率。
1.3.2 确定最佳药物浓度用上述方法得出土鳖虫醇提液药不同浓度对胃癌细胞的作用，选取的不同药物作用浓度分别为：8，7.5 ，6 ，5 ，4 ，3 ，2，1 mg/ml。
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