打开APP
userphoto
未登录

开通VIP,畅享免费电子书等14项超值服

开通VIP
实验技术篇|小鼠尾静脉大体积快速注射视频(流体动力学注射)
小鼠尾静脉大体积快速注射和小鼠正常尾静脉注射有什么区别?

      顾名思义,小鼠IV大体积快速注射就是大体积的溶液(1ml以上)快速注射(3-5秒左右)到小鼠的尾静脉,而正常小鼠IV给药,一般是给予0.05-0.2ml体积,且缓慢推入,减少小鼠应激。

为什么要进行大体积快速注射?有什么用途吗?

      小鼠尾静脉大体积快速注射专业说法是小鼠流体动力学注射(Hydrodynamic injection)是将大体积质粒DNA溶液经小鼠尾静脉快速注射入小鼠体内,进而获得转基因表达的方法,经尾静脉大容积注射质粒可引起小鼠体内转基因的高度表达。比如,研究乙肝病毒的小鼠模型,就是将携带乙肝相关感染基因和病毒包装基因的质粒进行快速注射到小鼠尾静脉,促使肝脏细胞内表达乙肝病毒,形成乙肝小鼠模型。

小鼠流体动力学注射体内表达的机制是什么?

      流体动力学注射通过静脉注射使大体积质粒DNA溶液迅速进入体循环,大量的液体淤积在肝脏,肝内压力升高,迫使肝窦内皮细胞窗增大,肝细胞膜出现暂时性小孔,质粒DNA随之进入肝细胞,进而表达目的基因,其他组织也会收到巨大的液体压力允许质粒进入表达。

质粒注射液的体积是影响基因在不同组织中表达的关键因素

     研究者以luciferase作为报告基因,分别选择了质量为11-13g, 18-20g, 30-33g的小鼠,通过尾静脉注射等质量不同体积的质粒,结果表明当注射液体积占小鼠体质量的8%~10%时,转基因的表达效果最佳。

注射时间也影响转基因的表达水平

       最佳的注射速度为3-5秒,超过8秒时则转基因表达很低甚至检测不到。但是注射体积越大,注射速度越快时,引起的肝脏损伤也越严重,同时根据预实验结果决定注射时间,因此合理控制注射时间至关重要。(下图仅为参考)

附:小鼠流体动力学注射视频和技巧

视频一

视频二

具体步骤:

1 把小鼠使用购买的专用固定器固定,或者50ml自制离心管,或直接放在笼子上,尾巴从笼缝里出来,用左手拉着(本视频即是,这样省去固定的时间,简单快捷,建议使用)(只要不影响小鼠的正常状态,便于快速顺利注射,方法选择适合自己的也OK!)。

2 使用酒精擦拭要注射的一侧尾静脉,(两侧是静脉,中间的是动脉),使得血管充盈,(一般小鼠两侧不一样,观察后选择相对血液充盈的一侧进行注射)

3 选择0.5mm针头和2.5ml注射器0.5mm针头是做小鼠IV比较粗的了,再大就是大鼠的针头了,针头太小(0.45mm,0.4mm)不利于快速注射大体积,在3秒左右推不进去这么大体积的

4 进针,针斜面口向上,针尖刺入后,平行进针,即只要针尖不出来,控制针尖在皮下推进,距离表皮能多薄就多薄,针身在血管里推行清晰可见且柔滑时基本就进去了

5 推针,推针时千万注意小鼠尾巴,不弯曲,不随意乱动,即左手把小鼠尾巴向后面拽住,不能松动。使用很大的力气快速推入液体即可。(只要控制针头冲不下来,使劲推就可以,不然慢了就失去快速注射大体积的意义了)

参考文献:

1. Liu F, Song Y K, Liu D. Hydrodynamics-basedtransfection in animals by systemic administration of plasmid DNA[J]. Genetherapy, 1999, 6(7): 1258.

2 Arad U, Zeira E, El-Latif M A, et al.Liver-targeted gene therapy by SV40-based vectors using the hydrodynamicinjection method[J]. Human gene therapy, 2005, 16(3): 361-371.

3 Feng DM, He C X, Miao C Y, et al. Conditions affecting hydrodynamics‐based genedelivery into mouse liver in vivo[J]. Clinical and experimental pharmacologyand physiology, 2004, 31(12): 850-855.

4 邦耀生物、网络公开资料

本站仅提供存储服务,所有内容均由用户发布,如发现有害或侵权内容,请点击举报
打开APP,阅读全文并永久保存 查看更多类似文章
猜你喜欢
类似文章
【热】打开小程序,算一算2024你的财运
尾静脉注射应用——那些你不知道的流体动力学
如何识别转基因?
AAV的包装纯化浓缩方法总结
问考| 新高考科目你是否选考生物和化学?一起来看看首次选考卷的答题技巧及易错题的专家点评
论流体动力学的应用
动物实验基本技术
更多类似文章 >>
生活服务
热点新闻
分享 收藏 导长图 关注 下载文章
绑定账号成功
后续可登录账号畅享VIP特权!
如果VIP功能使用有故障,
可点击这里联系客服!

联系客服