迈瑞网织红通道校准方案简介

作者：谢键、杨红玮、叶燚、孙毅

血细胞分析仪的校准通常包含白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）、红细胞（HCT/MCV）和血小板（PLT）这5个指标^[1]。近年来，随着带有网织红细胞检测功能的血细胞分析仪在临床上的普遍应用，网织红细胞计数正在从传统的手工染色镜检法转变为仪器法。

2011年，《网织红细胞计数的参考方法》正式颁布实施，为网织红细胞的计数校准提供了依据。但是，该方法仍然为手工计数法，不能满足网织红细胞自动化检测校准的需求，新的网织红细胞计数参考方法正由国际血液学标准化委员会等国际性标准化组织研究中^[2]。

网织红细胞是成熟红细胞的前期，随着细胞成熟，网织红细胞逐渐丢失遗传物质RNA，直至完全不含RNA从而达到成熟状态。由于从成熟红细胞到网织红细胞是一个渐变过程，用荧光法测量时荧光信号逐渐增强，因此可通过该信号的强度判断细胞的成熟度。

白细胞计数（WBC）、红细胞计数（RBC）、血红蛋白含量（HGB）、红细胞压积（HCT/MCV）和血小板计数（PLT）等参数，可以使用校准物通过直接调整校准系数进行校准。但网织红细胞因具有在高荧光、中荧光和低荧光强度区连续分布的特殊性质，用校准物直接校准网织红细胞的百分比的方法，不能准确反映其在不同荧光强度区域连续分布的特征，也无法保证准确测量LFR和IRF等相关参数。

增益校准

为了在校准网织红细胞百分比的同时，也能校准LFR和IRF等参数，迈瑞采用调整散点图增益的方法对RET通道进行校准（简称增益校准）。正常红细胞在网织红细胞通道散点图荧光方向重心（FLP）是恒定的，迈瑞产品校准物SC-CAL PLUS的红细胞粒子在网织红细胞通道的荧光方向重心也是恒定的，因此可以建立两者之间FLP的相关性。

在客户端的仪器上，工程师可以使用产品校准物SC-CAL PLUS，根据该批号校准物的RBC增益值，调整RET通道中红细胞粒子在散点图中上下左右的空间位置（即红细胞重心），这个过程即为增益调整。在此过程中，LFR和IRF的相对空间位置也一并获得调整。通过该方法，可以将用参考方法^[3]测量得到的新鲜血RET%传递到客户端的仪器检测结果。

增益调整过程如图1所示，以贯穿上下图的两根白线为参考，可见下图的细胞团比上图的细胞团位置略靠右一点。

图1. 网织红通道增益调整示意图

经过增益校准之后的仪器所测得RET%和人工镜检的RET%的相关性见图2。

图2. 仪器法RET%和人工镜检法RET%相关性

迈瑞血液分析标准化实验室参加了“卫生部临床检验中心——全国网织红细胞计数室间质量评价”项目（图3）。结果显示，RET%/RET#结果分布居中，表明与其他各临床实验室的结果有高度相关性和可比性，证明了迈瑞网织红细胞测量结果量值传递的可靠性。

图3. 2016年和2017年参加卫生部临检中心RET室间质评结果

综上所述，通过增益校准的方式，迈瑞网织红通道测量结果的准确性和溯源性得到了保证。尤其是可以同时对LFR、IRF等细胞团的空间位置进行调整，相比现有的网织红通道校准物只能校准RET%，增益校准的方式校准项目更加全面。

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参考文献：

[1] 中华人民共和国医药行业标准YY/T 0701-2008 血细胞分析仪用校准物（品）。

[2] 为网织红细胞计数校准验证提供依据——《网织红细胞计数参考方法》标准解读。

[3]CLSI：H44-A2 Methods forReticulocyte Counting (Automated Blood Cell Counters, Flow Cytometry, andSupravital Dyes); Approved Guideline—Second Edition.