断奶仔猪腹泻是养猪生产中危害最大的疾病之一，在养猪生产中常在仔猪日粮中添加抗生素及化学合成药物等添加剂以防治断奶仔猪腹泻，易导致细菌耐药性及畜产品药物残留的发生。研究表明，中药可提高腹泻小鼠肠道黏膜乳糖酶活性，改善腹泻小鼠的临床症状、剖检变化、病理组织学变化和超微结构，可有效预防大肠杆菌性小鼠腹泻。其中，香砂六君子汤是调和脾胃功能的经典方，广泛用于胃肠道疾病的治疗，如治疗脾虚泄泻、饮食积滞、消化不良等；若在香砂六君子汤中增加山楂、神曲和麦芽，可增强其健脾消食的功效，即本研究中采用的加味香砂六君汤。因此，本研究通过给断奶仔猪灌服产肠毒素性大肠杆菌，并在饲粮中添加加味香砂六君子汤水提物，探讨加味香砂六君子汤对21日龄断奶腹泻仔猪的血常规指标、血清二胺氧化酶活性的影响，为研制可防治断奶仔猪腹泻的中药饲粮添加剂提供研究依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 试验动物
21日龄断奶的长×大二元杂交健康仔猪48头，体重为（6.38±0.89） kg。
1.1.2 试剂
大肠杆菌（CVCC1560）；MH肉汤；二胺氧化酶（DAO）测定试剂盒；硫酸粘杆菌素；中药党参、茯苓、炒白术、木香、砂仁、炙甘草、山楂、神曲、麦芽。
1.2 试验方法
1.2.1 动物分组及处理
将48头21日龄平均体重6.39 kg长×大二元杂交断奶仔猪随机分为对照组、大肠杆菌组、大肠杆菌+硫酸粘杆菌素组（简称抗生素组）、大肠杆菌+中药组（简称中药组），每组12个重复，于断奶第2天给大肠杆菌组、抗生素组和中药组仔猪经口腔灌服1.0×1011CFU/mL大肠杆菌液5mL/头/日，给对照组仔猪经口腔灌服生理盐水5mL/日，连续2日，并分别给予对照组和大肠杆菌组仔猪无添加物的基础饲粮，给予抗生素组仔猪含20mg/kg硫酸粘杆菌素的基础饲粮，给予中药组仔猪含有加味香砂六君子汤水提物（以相当于饲粮中含3%的生药经3次水煎提取后，真空干燥后添加于饲粮中）的基础饲粮。所有仔猪均在漏缝地板的高床上单栏饲喂，自由采食和饮水，试验期为10d。
1.2.2 检测指标及方法
试验第3、6、10天，各组分别取3、3、6只仔猪，于前腔静脉采血10mL，取1mL全血进行抗凝处理，余下血液凝固后，3 000r/min离心5min以分离血清，于-20℃保存备测。动物血球分析仪检测各组猪血液白细胞数（WBC）、红细胞数目（RBC）、血红蛋白含量（HGB）、红细胞压积（HCT）、血小板数目（PLT）、血小板压积（PCT）。参照试剂盒说明，在450nm波长下测定各组猪血清DAO OD值，计算血清DAO活力值。
2 结果
2.1 灌服大肠杆菌对断奶仔猪血常规指标和血清二胺氧化酶活性的影响
由表1可知，与对照组相比，在除第3天外，第6、10天时大肠杆菌组断奶仔猪全血中白细胞（WBC）数目显著高于对照组（P<0.05），且第6天时大肠杆菌组仔猪血液血小板数量显著高于对照组（P<0.05）；其余时间两组仔猪的血液红细胞数（RBC）、血红蛋白含量（HGB）、红细胞压积（HTC）、血小板数目（PLT）及血小板压积（PCT）无显著差异（P>0.05）。
由表2可知，在断奶后第3天，与对照组相比，大肠杆菌组仔猪血清DAO活性显著升高（P<0.05），后期高于对照组，但无显著差异（P>0.05）。
2.2 中药对灌服大肠杆菌的断奶仔猪血常规指标和血清二胺氧化酶活性的影响
由表3可知，在断奶后第3天时，中药组仔猪血液的白细胞数、血小板数和血小板压积显著高于抗生素组（P<0.05）；在断奶后第6天，中药组和抗生素组仔猪血液WBC数量均显著低于大肠杆菌组（P<0.05）；在断奶后第10天，中药可显著提高断奶腹泻仔猪的血小板数（PLT）（P<0.05）。
由表4可知，在断奶后第3天时，中药可防止灌服大肠杆菌引起的DAO活性增加（P<0.05），在断奶后第10天，中药降低DAO活性的效果优于抗生素（P<0.05）。
3 分析与讨论
3.1 中药对灌服大肠杆菌的断奶仔猪血常规指标的影响
血液对保证机体正常的功能调节、新陈代谢及体内外环境平衡起重要作用，血常规检测是临床上最常见的基础化验项目之一。因此，血常规检测和分析对了解各种早期病变、疾病性质发生发展及治疗具有一定意义。
本研究表明，灌服大肠杆菌对引起断奶仔猪全血中的白细胞数（WBC）显著升高，而红细胞数（RBC）、血红蛋白（HGB）、红细胞压积（HCT）、血小板数（PLT）和血小板压积（PCT）无显著影响，说明灌服大肠杆菌液可引起断奶仔猪出现炎性感染。研究表明，血液WBC、RBC、HGB、HCT、PLT及PCT值增高多见于细菌性炎症反应、严重呕吐、腹泻、大面积烧伤及各种原因导致的组织脱水等。仔猪经口服肠毒性大肠杆菌造模处理后，发生了细菌炎性腹泻，导致机体组织严重脱水和血液浓缩，从而引起大肠杆菌组仔猪上述血液指标均有高于对照组的趋势。
本研究表明，中药可有效降低断奶腹泻仔猪血液WBC数量，具有良好的防治大肠杆菌性肠炎的功效，且中药需连续使用6 d后效果较明显，同时中药组仔猪血液WBC数显著低于大肠杆菌组，其他各指标也均低于大肠杆菌组和抗生素组。研究表明，白细胞具有抵抗外侵细菌的能力，机体某部位发生炎性反应时白细胞计数会增加，说明加味香砂六君子汤具有减轻大肠杆菌引起的断奶仔猪肠道炎症程度。研究表明，香砂六君子汤可通过增强胃溃疡大鼠SOD活性，降低MDA含量和胃蛋白酶活性，具有良好的治疗胃溃疡功效；并能减轻胃黏膜下层的淋巴细胞浸润和局部血管的慢性炎症表现。
3.2 中药对灌服大肠杆菌的断奶仔猪血清二胺氧化酶活性的影响
二胺氧化酶（DAO）是哺乳动物小肠黏膜上层绒毛中细胞内酶，其活性与小肠绒毛细胞的核酸和蛋白合成密切相关，当小肠肠黏膜发生损伤时，肠道黏膜通透性增加，DAO从小肠黏膜释放入血引起血液DAO活性升高，因此，血液DAO的活性可间接反映肠黏膜的完整性及损伤程度，是监测肠道屏障功能的重要指标，腹泻严重程度与血DAO活性成显著的相关性。
本研究表明，在断奶第3天，大肠杆菌组仔猪血清DAO活性显著高于对照组，即说明大肠杆菌组断奶仔猪小肠肠黏膜损伤程度远大于对照组，使得肠绒毛中DAO大量进入血液中，导致大肠杆菌组断奶仔猪血液中DAO活性显著升高。研究表明，能引起血液中DAO活性升高的因素有很多，如断奶应激导致的肠道黏膜损伤、炎症性腹泻、动物怀孕等，DAO进入肠细胞间隙，使血液中DAO活性升高。
本研究表明，在断奶后第3天，中药可显著降低仔猪血清DAO活性；第10天时，中药组仔猪血液DAO活性最低且低于抗生素组，说明中药组断奶腹泻仔猪小肠绒毛完整性远高于大肠杆菌组仔猪，即中药可有效修复断奶腹泻仔猪小肠肠黏膜损伤，其效果优于硫酸粘杆菌素。研究表明，加味四君子汤可有效的调整肠黏膜破损小鼠的肠道菌群、降低血液DAO活性，降低肠道通透性和细菌易位率等功效。
4 结论
灌服大肠杆菌可引起断奶仔猪血液WBC数量和血清二胺氧化酶活性升高，即可造成仔猪肠道黏膜发生损伤；加味香砂六君子汤可降低灌服大肠杆菌的断奶仔猪血液白细胞数，增加血小板数和血小板压积，可降低断奶腹泻仔猪血清二胺氧化酶活性，减轻肠道黏膜损伤程度，且保护作用优于硫酸粘杆菌素，其保护作用机制有待进一步研究。
注：本文原文刊登在《中国畜牧杂志》2015年15期，作者为黎佳颖，张翥，王明周，王晓谦，涂君平，陈佳，董国忠，王自力。如需阅读本期纸刊更多精彩内容，可与《中国畜牧杂志》编辑部联系。
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