消毒剂和激素对野生金线莲外植体的诱导影响

    金线莲在我国主要分布于亚热带地区：福建、广东、广西、浙江、江西、海南、云南、四川、贵州以及西藏南部等省区。江西省赣州市安远县鹤子村以及赣州市龙南县等地有上百年的销售本地野生金线莲的历史。市场上，1kg野生金线莲鲜品要几千元，干品高达上万元。但是由于其野生资源有限，而且再生能力差，使得目前江西野生金线莲资源匾乏。利用组培快繁技术能对江西野生金线莲进行有效保护，能够大大增加当地农户的经济收入。但江西野生金线莲的快繁技术研究鲜有报道。因此，笔者通过对比不同消毒剂在不同处理时间对江西野生金线莲的消毒效果，以及不同浓度6-BA和NAA组合对其外植体诱导率的影响，以期为江西野生金线莲的组织培养和快速繁殖提供理论依据。

一、材料与方法

1、材料

1.1 研究对象



    野生金线莲带腋芽的茎段，于2012年6月采自江西龙南九莲山自然保护区

1.2 主要试剂



    所用试剂均为国产分析纯，市售。

2、方法

2.1 升汞对江西野生金线莲外植体消毒效果的影响



    取江西野生金线莲外植体，先用酒精消毒30，，再用浓度0.1%升汞分别处理江西野生金线莲外植体8，10，12，14，16，18和20min。消毒完后用无菌蒸馏水冲洗3-5遍，将外植体切成带腋芽的茎段接种到培养基中，培养基以MS为基本培养基，并同时加入6-BA和NAA这2种植物激素。每瓶接1株，每个处理接种20瓶。

2.2 次氯酸钠对江西野生金线莲外植体消毒效果的影响



    取江西野生金线莲外植体，先用酒精消毒30，，再用浓度2%次氯酸钠分别处理江西野生金线莲外植体10，15，20，25和30min。消毒完后用无菌蒸馏水冲洗3-5遍，将外植体切成带腋芽的茎段接种到培养基中，培养基以MS为基本培养基，并同时加入6-BA和NAA这2种植物激素。每瓶接1株，每个处理接种20瓶。

2.3 次氯酸钙对江西野生金线莲外植体消毒效果的影响



    取江西野生金线莲外植体，先用酒精消毒30s，再用浓度10%次氯酸钙分别处理江西野生金线莲外植体10，15，20，25和30min。消毒完后用无菌蒸馏水冲洗3-5遍，将外植体切成带腋芽的茎段接种到培养基中，培养基以MS为基本培养基，并同时加入6-BA和NAA这2种植物激素。每瓶接1株，每个处理接种20瓶。

2.4 饱和漂白粉对江西野生金线莲外植体消毒效果的影响



    取江西野生金线莲外植体，先用酒精消毒30s，再用饱和漂白粉溶液分别处理江西野生金线莲外植体10，15，20，25和30min。消毒完后用无菌蒸馏水冲洗3-5遍，将外植体切成带腋芽的茎段接种到培养基中，培养基以MS为基本培养基，并同时加入6-BA和NAA这2种植物激素。每瓶接1株，每个处理接种20瓶。

2.5 6-BA和NAA对江西野生金线莲外植体消毒效果的影响



    以MS培养基为基本培养基，并同时加入6-BA和NAA这2种植物激素。其中6-BA采用3种不同浓度，分别为1，2和3mg/L；1VAA采用5种不同浓度，分别为0.1，0.2，0.5，1.0和1.5mg/L。

2.6 试验数据统计



    1个月后统计用不同消毒剂在不同处理时间下外植体的污染率、成活率和死亡率，以及不同培养基对外植体诱导率的影响。计算各种指标的公式如下：成活率（%）=（外植体成活数量/外植体接种数量）x100；死亡率（%）=（外植体死亡数量/外植体接种数量）x100；污染率（%）=（外植体污染数量/外植体接种数量）x100；诱导率（%）=成功诱导芽数量/诱导外植体数量x100。

二、结果与分析

1、不同消毒剂对江西野生金线莲外植体消毒效果的影响

1.1 浓度0.1%升汞对江西野生金线莲外植体消毒效果的影响



    由研究结果可知，用浓度0.1%升汞消毒时，污染率随着消毒时间的增加在降低，死亡率在处理14min中首次出现，并随着消毒时间的增加而增加；存活率随着消毒时间的延长先增加后降低，在处理16min中达到最大值为82%。综上可知，用浓度0.1%升汞消毒时最适宜江西野生金线莲的消毒时间为16min。

1.2 浓度2%次氯酸钠在不同消毒时间对江西野生金线莲外植体消毒效果的影响



    研究发现，用浓度2%次氯酸钠消毒时，污染率随着消毒时间的增加变化不大，污染率都在96%以上，死亡率都为0，存活率随着消毒时间的增加首次在25min中出现，但存活率太低，只有4%。综上可知，用浓度2%次氯酸钠对江西野生金线莲消毒时由于污染率太高（高达%%以上），且存活率太低（只有4%），所以浓度2%次氯酸钠不适合用于江西野生金线莲外植体的消毒。

1.3 浓度10%次氯酸钙在不同消毒时间对江西野生金线莲外植体消毒效果的影响



    由研究结果可知，用浓度10%次氯酸钙消毒时，污染率随着消毒时间的增加并没有变化，都为100%，死亡率和存活率都为0。综上可知，用10%次氯酸钙对金线莲消毒时由于污染率太高（高达100%），且存活率为0，所以10%次氯酸钙不适合用于江西野生金线莲外植体的消毒。

1.4 饱和漂白粉溶液在不同消毒时间对江西野生金线莲外植体消毒效果的影响



    研究发现，用饱和漂白粉溶液消毒时，污染率随着消毒时间的增加并没有变化，都为100%死亡率和存活率都为0。综上可知，用饱和漂白粉溶液对江西野生金线莲消毒时由于污染率太高（高达100%），且存活率为0，所以饱和漂白粉溶液不适合用于江西野生金线莲的消毒。

2、不同浓度的6-BA和NAA组合对江西野生金线莲外植体诱导率的影响

    由研究结果可知，当6-BA的浓度为1.0mg/L时，随着NAA浓度的增大诱导率逐渐降低；当NAA浓度为0.1mg/L时，诱导率最大为63%。当6-BA的浓度为2.0mg/L时，随着NAA浓度的增大诱导率也在降低；当NAA浓度为0.1mg/L和0.2mg/L时诱导率最大，都为98%r。当6-BA的浓度为3.0mg/L时，随着NAA浓度的增大诱导率也在降低；当NAA浓度为0.1mg/L和0.2mg/L时诱导率最大，都为98%。但在6-hA的浓度为3.0mg/L时有玻璃化现象出现，且随着NAA浓度的增加玻璃化现象更明显。综合以上情况可知，最适宜金线莲外植体诱导的培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA；在此培养基中，金线莲的诱导率高达98%。

三、结论与讨论

    试验研究了浓度0.1%升汞、浓度2%次氯酸钠、浓度10%次氯酸钙、饱和漂白粉溶液等4种消毒剂在不同处理时间对江西野生金线莲外植体的消毒效果，从而得到最适宜江西野生金线莲外植体的消毒药剂为浓度0.1%升汞，最适宜的消毒时间为16min，其污染率只有10%，存活率高达82%。同时，试验还通过比较不同浓度的6-BA和NAA组合对江西野生金线莲外植体诱导率的影响，从而得到最适宜金线莲外植体诱导的培养基为：MS+2.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA；在此培养基中，金线莲的诱导率高达98%。

    目前，台湾金线莲和福建金线莲品种选育及快繁技术研究已成功运用于商业化大规模生产，在福建地区已经形成了较大的产业链。江西野生金线莲其叶面颜色较台湾品种和福建品种更深，其药用价值可能会更高于台湾金线莲和福建金线莲，但江西野生金线莲的优良品种选育及快繁技术的研究鲜有报道。试验利用江西野生金线莲为外植体成功的诱导出其组培瓶苗，为实现江西野生金线莲的商业化大规模生产提供了一点技术储备。