病毒包涵体染色法（二）

来源：网络

病毒非常微小，最小的约为20nm左右。因而用一般的光学显微镜是无法观察到它的，从病理技术的角度，也就无法对它们进行鉴定了。但是当它们进入机体，形成包涵体后，就可以根据它们的所在部位和形态，应用不同的特殊素对它们进行显示和确定。

Giemsa法显示海蓝组织细胞

I 试剂的配制

取0.01M的PBS（pH7.6）40ml，加入Giemsa原液1ml混合均匀后即可使用。

II 操作方案

1.常规石蜡切片脱蜡至水

2.0.5%高锰酸钾水溶液氧化切片5分钟

3.自来水洗。

4.2%草酸水溶液处理切片1-2分钟。

5.自来水洗PBS洗。

6.浸染于上述稀释液，在室温中染12-24小时。

7.用正丁醇分化切片，于镜下控制至合适为止。

8.正丁醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

结果：海蓝组织细胞胞浆可见到充满海蓝色小空泡，有的可见到海蓝色子颗粒。

注意事项：

1.配Giemsa浸染液时，可根据不同的病毒包涵体来配制。如染胞浆内的包涵体，PH可用5.0，7.6，如果染核内的病毒包涵体PH可用7.6或9.5,即可获得满意的结果。

2.应用柠檬酸分化切片时，浓度应特别低，如果浓度较高，很容易将着染的颜色除去，因为浸染液的浓度很稀。

3.切片进入丙酮脱水时，可将着染的紫色除去，留下绿色，因而切片的最后结果有绿色的显示。

4.切片在丙酮脱水后进入下一步丙酮和二甲苯时，直接进入，不要控干切片，切片如在空气中暴露过长时间，可吸收大量水分，导致切片不能透明。

伊红和甲基蓝显示合胞病毒和巨细胞病毒包涵体

1.切片脱蜡至水，蒸馏水洗。

2.浸入PBS3次，3分钟/次。

3.浸入伊红和甲基蓝浸染液中浸染过夜。

4.0.01MPBS冲洗10-15分钟。

5.0.01柠檬酸水溶液分化切片，镜下控制。

6.风干，二甲苯透明，中性树胶封固。

结果：合胞病毒和巨细胞病毒包涵体着染深蓝色或绿色。于细胞核内，胶原纤维着染浅蓝绿色。SARS病毒包涵体不着色。

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