小编最近参加浙江省医学实验动物与动物实验培训班学习，为了做实验要缴学费，还要上课去签到（小编碎碎念：其实相比做实验，来听课倒是逃离实验室的一种享受了。），但组里导师又逼着回来做实验，小编好为难（头疼、头疼、头疼。。。），上三天理论课+考试，通过才能拿实验动物资格证（小编碎碎念：其实做动物实验，重在实践，做多了就自然会了，听这些理论课并没有什么鸟用，但为了进动物房，必须咱组里要有个证才行，师姐都毕业了，以后怎么做动物实验？也是伤脑筋了。）。好了，废话有点多了，以下进入正题：
实验整体简介：将人胰腺癌细胞株（PANC1，BXPC3，L3.6等等）接种于裸鼠腹侧处皮下，每周测量肿瘤块大小，第六周处死小鼠。取出肿瘤组织及相关脏器，处理后，做病理切片及做电镜检查，免疫法检测相关抗原。接着做皮下肿瘤组织细胞及细胞株培养，HE 染色观察。
一、实验材料准备
裸小鼠BALB/ c nu- nu ，4～6 周龄，体重16～20 g，雌雄兼备，SPF 级环境中饲养，恒温25～27 ℃，恒湿45%～50% ，饮用水及食物均经灭菌。
二、人胰腺癌细胞株体外传代培养
1. 将胰腺癌细胞株放入含10 %的DMEM或RPMI-1640 完全培养基中，置于37 ℃、5 %CO2 培养箱中，每2d 换液1次，2～3d，胰酶消化，一传3 传代培养。
2. 待细胞布满瓶底时,收集单细胞悬液，每只5 ×106 肿瘤细胞，0. 2ml ，注射于裸小鼠腹侧处皮下，建立肿瘤模型。
3. 每周用游标卡尺测量肿瘤大小，按公式V= π/ 6 ×长×宽×高，计算肿瘤大小，并绘制生长曲线。
三、血清学检测
第6 周，处死小鼠，收集血液于试管中，静置取血清，检测肿瘤相关抗原及淀粉酶。
四、巨检
1. 处死裸鼠后，皮下剥离肿瘤，记录质地、浸润、血供情况，观察有无腹腔粘连，各脏器转移状况。
2. 将肿瘤组织、肺、肝、脾、肠系膜、十二指肠、胃、脑等取标本置于10 %的福尔马林固定液中待用。
五、病理学检测
上述标本常规石蜡包埋切片，HE 染色，光镜观察。
六、镜检
1. 肿瘤组织细胞培养及活细胞观察：取新鲜裸鼠皮下肿瘤组织，PBS 漂洗3 次，剪成1 m3 大小，0. 25 %的胰酶消化，去除粗大组织后，制成单细胞悬液，置37 ℃、5%CO2 培养箱中培养，倒置显微镜下观察其形态、生长情况等，与先前的胰腺癌细胞株进行比较。
2. 细胞HE 染色及形态学观察：肿瘤细胞及细胞株相同量培养于含有盖玻片的六孔板中（爬片）， 生长至次融合后，弃培养基，PBS 洗3 次，2. 5 %戊二醛固定，PBS 洗3 次，HE 染色，荧光镜下观察。
联系客服
