小编最近参加浙江省医学实验动物与动物实验培训班学习,为了做实验要缴学费,还要上课去签到(小编碎碎念:其实相比做实验,来听课倒是逃离实验室的一种享受了。),但组里导师又逼着回来做实验,小编好为难(头疼、头疼、头疼。。。),上三天理论课+考试,通过才能拿实验动物资格证(小编碎碎念:其实做动物实验,重在实践,做多了就自然会了,听这些理论课并没有什么鸟用,但为了进动物房,必须咱组里要有个证才行,师姐都毕业了,以后怎么做动物实验?也是伤脑筋了。)。好了,废话有点多了,以下进入正题:
实验整体简介:将人胰腺癌细胞株(PANC1,BXPC3,L3.6等等)接种于裸鼠腹侧处皮下,每周测量肿瘤块大小,第六周处死小鼠。取出肿瘤组织及相关脏器,处理后,做病理切片及做电镜检查,免疫法检测相关抗原。接着做皮下肿瘤组织细胞及细胞株培养,HE 染色观察。
一、实验材料准备
裸小鼠BALB/ c nu- nu ,4~6 周龄,体重16~20 g,雌雄兼备,SPF 级环境中饲养,恒温25~27 ℃,恒湿45%~50% ,饮用水及食物均经灭菌。
二、人胰腺癌细胞株体外传代培养
1. 将胰腺癌细胞株放入含10 %的DMEM或RPMI-1640 完全培养基中,置于37 ℃、5 %CO2 培养箱中,每2d 换液1次,2~3d,胰酶消化,一传3 传代培养。
2. 待细胞布满瓶底时,收集单细胞悬液,每只5 ×106 肿瘤细胞,0. 2ml ,注射于裸小鼠腹侧处皮下,建立肿瘤模型。
3. 每周用游标卡尺测量肿瘤大小,按公式V= π/ 6 ×长×宽×高,计算肿瘤大小,并绘制生长曲线。
三、血清学检测
第6 周,处死小鼠,收集血液于试管中,静置取血清,检测肿瘤相关抗原及淀粉酶。
四、巨检
1. 处死裸鼠后,皮下剥离肿瘤,记录质地、浸润、血供情况,观察有无腹腔粘连,各脏器转移状况。
2. 将肿瘤组织、肺、肝、脾、肠系膜、十二指肠、胃、脑等取标本置于10 %的福尔马林固定液中待用。
五、病理学检测
上述标本常规石蜡包埋切片,HE 染色,光镜观察。
六、镜检
1. 肿瘤组织细胞培养及活细胞观察:取新鲜裸鼠皮下肿瘤组织,PBS 漂洗3 次,剪成1 m3 大小,0. 25 %的胰酶消化,去除粗大组织后,制成单细胞悬液,置37 ℃、5%CO2 培养箱中培养,倒置显微镜下观察其形态、生长情况等,与先前的胰腺癌细胞株进行比较。
2. 细胞HE 染色及形态学观察:肿瘤细胞及细胞株相同量培养于含有盖玻片的六孔板中(爬片), 生长至次融合后,弃培养基,PBS 洗3 次,2. 5 %戊二醛固定,PBS 洗3 次,HE 染色,荧光镜下观察。
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