作者：Lucky King（转载请注：解螺旋·医生科研助手）
文献：LincRNA-p21通过海绵微RNA-17-5p抑制肝星状细胞的Wnt/β-联蛋白途径活化（回复170505下载文献）
查阅文献有许多lncRNA参与肝纤维化的进展，为了确定是哪些lncRNA在酚酸B（SalB）处理肝星状细胞（HSC）的模型中发挥活化作用，RT-PCR检测了H19、lincRNA-p21、MALAT1、APTR和GAS5的表达。
与对照相比，模型组中lincRNA-p21和GAS5显著增加，H19、MALAT1和APTR没有影响（Fig.1A），lincRNA-p21和GAS5的表达量分别增加12.6倍和1.4倍；所以选择lincRNA-p21进行下步实验。
检测原代HSC细胞中LincRNA-p21：与第2天相比，lincRNA-p21在第5天下降了52％（Fig.1B），表明在HSC激活期间lincRNA-p21降低。
这些结果表明，在活化的HSC中，lincRNA-p21被下调，可能参与Sal B对HSC活化的过程。
CCK-8检测对增殖影响：空白组Cont、模型组Sal B处理、Sal B+si-Ctrl组、Sal B+lnc-p21组，模型组增殖显著降低，模型增加lnc-p21处理后增殖能力明显恢复（Fig.2A）；
RT-PCR结果显示，模型组α-SMA和Col1A1的mRNA表达量显著下降76％和84％，模型+lnc-p21后mRNA表达量几乎恢复正常值（Fig.2B）；
与RT-PCR结果一致，WB检测显示模型组α-SMA、TypeⅠ collagen蛋白表达量显著降低，Sal B+lnc-p21组蛋白表达量几乎恢复正常值（Fig.2C-D）；
这些数据表明lincRNA-p21在SalB处理的HSC模型中起重要作用。
据文献报道，异常激活的Wnt/β-连环蛋白（Wnt/β-catenin）途径参与肝纤维化过程。
WB检测显示，细胞质和细胞核中的Wnt/β-catenin显著增加，同时Wnt/β-catenin途径下游基因C-myc，随培养时间显著增加（Fig.3A）；
接着检测Sal B是否对Wnt/β-catenin通路活性有影响。Sal B处理模型组导致TCF活性显著减少，Sal B+lnc-p21组活性恢复（Fig.3B）；
Western印迹显示，与空白组相比，模型组P-β-catenin蛋白水平显著增加4.5倍；模型组细胞质细胞核中的β-catenin蛋白水平显著降低。检测转染了si-lnc-p21并经Sal B处理的细胞，lincRNA-p21的沉默显著抑制了P-β-catenin蛋白；同时，lincRNA-p21的缺失使Sal B处理的细胞质、细胞核中β-catenin蛋白水平恢复（Fig.3C）；
LaminA为核标记，排除细胞质中核蛋白污染；HSP90细胞质标记，排除细胞核中细胞质蛋白污染，即质控。
LincRNA-p21通过miR-17-5p使Wnt/β-catenin途径失活
作者先前研究miR-17-5p过表达有助于Sal B处理的HSC模型中Wnt/β-catenin通路的激活，接下来研究miR-17-5p、lincRNA-p21和Wnt/β-catenin三者关系。
在lincRNA-p21过表达的HSC中检测miR-17-5p，其表达显著降低（Fig.4A）；
生物信息学分析，lincRNA-p21序列中存在miR-17-5p结合位点（Fig.4B）；
为了研究lincRNA-p21是否为miR-17-5p的靶标，使用pmirGLO构建含有miR-17-5p结合位点的pmirGLO-lnc-p21-wt（结合位点突变的pmirGLO-lnc-p21-mut）荧光素酶报道子质粒。进行共转染，荧光素酶实验：miR-17-5p+pmirGLO-lnc-p21-wt组荧光素酶活性显著降低（Fig.4C）。
lincRNA-p21是miR-17-5p的靶标，（三个角色，先说清其中两个的关系了）。
接下来再看，miR-17-5p卷入了lincRNA-p21和HSC活化之间的关系。
lincRNA-p21过表达细胞增殖显著受到抑制，将miR-17-5p模拟物转染到lincRNA-p21过表达细胞中，细胞增殖能力恢复（Fig.5A）；
RT-PCR和WB显示，lincRNA-p21过表达显著降低α-SMA、Col1A1；但共转染miR-17-5p后，α-SMA、Col1A1表达量显著回升（Fig.5B-D）；
证实：①lincRNA-p21在HSC活化中的抑制作用；②这种作用可以被miR-17-5p阻断。表明lincRNA-p21抑制HSC活化的过程，是部分通过miR-17-5p实现的。
miR-17-5p的抑制作用肯定是Wnt/β-catenin这条通路咯，得验证。
仅有lincRNA-p21，P-β-catenin、GSK3β（是Wnt/β-catenin通路关键原件）显著增加，β-catenin显著降低；共转染miR-17-5p后，各指标恢复（Fig.6A）；
TCF活性结果相一致（Fig.6B）；
将GSK3β基因沉默，RT-PCR检测：lincRNA-p21表达量显著降低，miR-17-5p的表达量显著增加（Fig.6C）；
这表明活化的Wnt/β-catenin途径抑制lincRNA-p21，巴特，有助于加强miR-17-5p的表达。
RNA免疫共沉淀表明：与IgG相比，lincRNA-p21和miR-17-5p共沉淀分别为10.5倍和16.1倍（Fig.6D）。根据荧光素酶测定，证实lincRNA-p21吸附到Ago2相关RNA诱导的沉默复合物，并与miR-17-5p具有相互作用。
Atlast，lincRNA-p21诱导Wnt/β-catenin通路的失活是通过miR-17-5p。
本文还是一篇海绵微RNA，所谓海绵RNA，个人理解为是一种缓冲，并不能完全抑制或者完全促进，只能在某种程度内调节。不是非左即右，非黑即白的绝对性，理解起来容易迷糊。
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