作者：米粒儿
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米粒儿发现当你了解了肿瘤基础研究的基本套路之后，再去审视一些其他疾病的研究简直不要太容易啊，满满的套路感啊。怎么，你不信，那么给你一篇子宫内膜异位机制研究的论文，大家自己总结一下疾型模法标吧！
文章题目：KRAS Activation and overexpression of SIRT1/BCL6 Contributes to the Pathogenesis of Endometriosis and Progesterone Resistance (回复170803可下载，一周有效)
子宫内膜异位是一个炎症环境，与孕酮抵抗，细胞增殖相关。可导致疼痛、不孕和妊娠丢失等临床现象。本文作者之前研究证实不孕患者正位子宫内膜中STAT3被磷酸化激活，进一步导致致癌基因BCL6过表达和HIF-1α稳态。
本文指出在月经周期中，女性的子宫内膜异位过程中KRAS活化和Sirtuin 1 (SIRT1)的过表达，KRAS条件性活化小鼠子宫内膜中SIRT1表达量明显上升。包括IHH信号通路在内的孕酮受体靶基因表达显著降低。
SIRT1和BCL6共定位与细胞核，且通过Chip实验分析发现他们与GLI1的启动子区域结合。作为孕酮重要的IHH信号通路调节因子，在子宫内膜异位女性中GLI1表达明显降低。
这些实验数据表明，KRAS, SIRT1 和BCL6在子宫内膜异位女性中同时过表达且可能参与子宫内膜异位发病过程中。
子宫内膜异位患者子宫内膜组织中，KRAS和SIRT1过表达
首先采用Western blot，作者分别检测了增殖期和分泌期患者体内的KRAS表达情况。发现增殖期和分泌期KRAS表达无明显差异，但是在子宫内膜异位患者中KRAS表达明显高于对照组。
之前的报道表明，KRAS的活化与SIRT1的过表达相关，并且KRAS活化可通过调节SITR1导致EMT现象并影响细胞迁移。因此作者也对SITR1表达进行检测。
结果证实在子宫内膜异位患者中，SITR1表达升高。但是需要特别注意的是，在月经期内SITR1表达并不会上升。
此外作者还发现在子宫内膜异位患者中，KRAS和SITR1呈现明显的正相关性。免疫组化结果也提示KRAS和SITR1在子宫内膜异位患者中表达升高。
子宫内膜异位患者中，SIRT1和BCL6的相关关系
BCL6是转录抑制因子参与B细胞发育和肿瘤形成，并参与SIRT1脱乙酰酶的招募过程。作者在之前研究中发现子宫内膜异位的不孕患者中BCL6表达显著升高。基于以上结果，作者推测SIRT1和BCL6在子宫内膜异位患者中表达具有相关性，采用western blot方法，作者证实在月经前期，SIRT1和BCL6的表达正相关。
在此基础上，为了进一步验证SIRT1和BCL6是否通过直接相互作用参与宫内膜异位调节。
作者首先采用免疫共沉淀实验分别在子宫内膜内皮细胞和人体组织中分别检测了二者相互作用。结果提示二者可发生直接相互作用。其次免疫组化结果显示SIRT1和BCL6在子宫内膜内皮细胞中共定位。
在狒狒动物子宫内膜异位模型中，SIRT1 和 BCL6表达异常
以上实验结果分别在细胞和患者组织中进行，接下来作者选取狒狒动物模型，诱导子宫内膜异位，分别在诱导前，诱导后3，9，15个月，采用免疫组化方法检测SIRT1和BCL6的表达。
结果表明诱导后9和15个月后，SIRT1和BCL6表达明显升高。
在子宫特异性KRAS活化的小鼠模型中，SIRT1过表达并且孕酮受体（PGR）靶基因表达异常
接下来，为了进一步研究KRAS和SIRT1表达的关系，作者建立了转基因小鼠模型，在该小鼠模型中KRAS呈现活化状态。采用免疫组化检测KRAS活化小鼠模型中，SIRT1表达明显升高。
此外作者还检测了PGR及其靶基因的表达水平，结果发现KRAS活化小鼠模型中PGR表达水平不变。但是P4靶基因Fst， Klf15，Lrp2和 Calb1表达显著升高。而IHH（Indian Hedgehog pathway）通路相关基因Ihh, Patch1, and Gli1表达显著下降。
以上实验结果表明KRAS通过调节SIRT1表达抑制PGR转录活性。
SIRT1 和BCL6抑制GLI1转录
P4治疗的耐药性主要是表现为PGR受体的缺失或者相关分子通路表达下降。这是子宫内膜相关疾病治疗的瓶颈之一。
为了进一步研究子宫内膜异位的分子机制，作者采用E2+MPA（诱导BCL6表达）处理Ishikawa细胞并且采用western blot方法检测BCL6和SIRT1表达。发现SIRT1稳定表达，而GLI1表达被抑制。
接下来作者采用ChIP实验方法探讨BCL6和SIRT1是否结合GLI1的启动子区域。结果显示BCL6通过与SIRT1直接相互作用抑制GLI1转录。 SIRT1和BCL6的表达升高可能是GLI1表达降低的原因，这最终造成了P4抵抗作用。
参考文献：KRAS Activation and overexpression of SIRT1/BCL6 Contributes to the Pathogenesis of Endometriosis and Progesterone Resistance
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