没人能随便 WB 成功，谁还不是踩坑过来呢

做了很久的 WB，走了很多弯路，其实 WB 想要做好并不难，总结了实验中可能会遇到的问题，分析了可能的原因及对应的解决方案，希望能帮到你。

Q：抗体使用有哪些注意事项？

A：使用抗体前需仔细阅读说明书，了解抗体的保存条件以及不同用途下的推荐稀释比例。

较高浓度的抗体（>0.5 mg/mL）通常性质更稳定，受生产工艺和成本控制等因素影响，不同品牌的抗体的浓度也不相同，所以购买时应注意比较，经验不足的实验者往往被抗体的体积迷惑，要注意相同质量下低浓度的抗体体积反而更大。

Q：半干转和湿转的优缺点有哪些？如何选择？

A：半干转和湿转两种转膜方式各有优劣。湿转适合所有的蛋白尤其分子量大的蛋白，转膜效率最佳，但对试剂消耗量较大，转膜时间长于半干转；半干转适合分子量小于 100 KD 的蛋白，省时、省试剂。

 

Q：什么是 WB 的灰度半定量分析？

A：通常用 Image J 或 photoshop 软件对各个样本的目的蛋白及其内参蛋白曝光后胶片的灰度值进行计算，按照灰度值的高低来半定量分析各个样品中蛋白的表达差异。