干货|肿瘤组织外泌体提取全流程

一些小伙伴们看了前期有关组织外泌体的软文后，咨询组织外泌体的提取方法，感受到大家的热情，吉凯基因外泌体平台组织外泌体项目的小伙伴们专门为大家准备了直观的流程图片，来吧，让我们一起看看以MDA-MB-231肿瘤组织为例的外泌体提取过程吧!

相关实验材料及耗材

冻存的肿瘤组织、胶原酶（Gibco）、PBS缓冲液、RPMI-1640基本培养基、Quick-Seal Centrifuge Tubes（Beckman）等。

相关仪器和设备

. 01

恒温孵育器（Eppendorf  ThermoMixer C）

. 02

小型冷冻离心机（Thermo Fresco21）

. 03

超速离心机（Beckman Optima XPN-90）

一、实验方法及步骤

1. 预处理样本：肿瘤组织获取后，用PBS缓冲液冲洗干净，切成小块，称重，20mg的肿瘤组织加入500ul 含Ⅰ型胶原酶的RPMI-1640基本培养基，如图：清洗干净的MDA-MB-231瘤体。

2. 酶解组织：将组织小块与胶原酶的混合液放到恒温孵育器中，37℃，震荡消化，期间进行1-2次轻柔的翻转，20min后轻轻地用移液枪吹打，混匀，继续消化直到无块状颗粒，如图：消化好的肿瘤组织

3. 去除细胞：4℃，300g离心5min，如图：

4. 去除组织碎片：转移上清液到新的1.5ml EP管中，4℃，2000g离心10min，如图：

5. 去除较小的杂质：转移上清液到新的1.5ml EP管中，4℃，10000g离心30min，如图：

6. 富集外泌体：收集上清液并用0.22um滤网过滤，装到Quick-Seal Centrifuge Tubes中，用预冷的PBS补满，4℃，120000g离心90min，可明显观察到沉淀，此沉淀的为外泌体粗提物，如图：

7. 纯化外泌体：弃上清，用PBS重悬沉淀，并装到新的Quick-Seal Centrifuge Tubes中，4℃，120000g离心70min，此次的白色沉淀即为外泌体。

8. 小心的去除上清，用适当体积的PBS重悬沉淀，-80保存即可。

二、MDA-MB-231肿瘤组织

外泌体的鉴定

1. BCA定量：初步判断获得的外泌体含量。

样本名称	样本量	外泌体质量
MDA-MB-231 肿瘤组织	0.4g	680ug

2. NTA粒径分析，符合经典外泌体粒径大小。

浓度：2.5E+11 Particles / mL

3.TEM透射电镜形态观察，符合外泌体形态特征。

4.WB外泌体标志物检测。

三、总 结

样本名称	定量	TEM	NTA		WB
			浓度	大小	TSG101	Alix
MDA-MB-231肿瘤组织	√	√	√	√	√	√

综上：“MDA-MB-231肿瘤组织“样本外泌体的分离鉴定符合外泌体的质检标准。

【参考文献】

1.JOURNAL OF EXTRACELLULAR VESICLES, 2017 VOL. 6, 1348885

2.JOURNAL OF EXTRACELLULAR VESICLES 2020, VOL. 9, 1722433