维吾尔药大戟脂中2个新的三萜

摘 要：目的  研究大戟脂（多脂大戟Euphorbia resinifera的树脂状分泌物）的化学成分。方法 采用反相C₁₈、硅胶、凝胶柱色谱、制备型HPLC等方法进行分离纯化，通过红外、紫外、高分辨质谱、一维和二维的核磁数据和结合参考文献鉴定化合物的结构。结果  从大戟脂甲醇提取物中分离得到了2个化合物，分别鉴定为大戟烷-8-烯-3,25-二醇-24-氯-7-酮（1）和22,23,24,25,26,27-六降大戟烷-8-烯-20-醇-3,7-二酮（2）。结论  化合物1为新的三萜，化合物2为新的降三萜，分别命名为大戟脂A和大戟脂B。

大戟脂（euphorbium）为多脂大戟Euphorbia resiniferaBerg. 的树脂状分泌物，干燥后成暗黄色或黄棕色，其粉末具有强烈的刺激性。《注医典》记载异名为排日非云。《中华草本》新疆维吾尔药卷中记载大戟脂用于瘫痪、面瘫、昏迷、抽搐、颤动、坐骨神经痛、关节疼痛、腹水、肠梗阻、白内障等疾病的治疗^[1]。大戟脂主要的化学成分为大环二萜和三萜，大环二萜包括瑞香烷型、续随子烷型、巨大戟烷型和12-去氧的巴豆烷型；三萜主要的类型为大戟烷型、甘遂烷型及相应的降三萜；另外还发现了二降倍半萜等类型^[2-11]。其中大环二萜生源途径由焦磷酸香叶基香叶酯通过首尾环合而成，相比于三萜，大环二萜在大戟科中含量较低^[12]。为了进一步研究大戟脂的化学成分，利用现代分离技术和光谱分析方法对其进行化学成分研究。从大戟脂中分离得到了2个化合物（图1），分别鉴定为大戟烷-8-烯-3,25-二醇-24-氯-7-酮（eupha-8-ene-3,25- diol-24-chloro-7-one，1）和22,23,24,25,26,27-六降大戟烷-8-烯-20-醇-3,7-二酮（22,23,24,25,26,27- sexnoreupha-8-ene-20-ol-3,7-dione，2）。其中化合物1为新的三萜，命名为euphoritriolA，化合物2为新的降三萜，命名为euphoritriolB。

1  仪器与材料

Jasco P-1020旋光仪、Aglient 1290 UPLC/6540 Q-TOF液相色谱/四极杆/飞行时间质谱仪（美国安捷伦科技公司）；Shimadzu UV-2401A紫外分光光度计（日本岛津公司）；Tenor 27红外光谱仪（德国Brucker公司）；Bruker DRX-500 MHz超导核磁共振共振仪（德国Brucker公司）；Agilent 1100和1200 HPLC（美国安捷伦科技公司）。

制备柱Waters X-Select CSH Prep RP C₁₈（150 mm×19 mm，5 μm，美国Waters公司）。硅胶、GF₂₅₄薄层色谱硅胶板（青岛海洋化工厂）；凝胶Sephadex LH-20（40～70 μm，瑞典Amersham Pharmacia Biotech AB公司）；反相填充材料Lichroprep RP-18 gel（40～63 μm，德国默克公司）。

药材大戟脂2016年7月购于新疆药材市场。由新疆维吾尔医学专科学校买买提努尔艾合提教授鉴定为多脂大戟E. resinifera Berg.的树脂状分泌物，标本（KUN No.1010725）保存于中国科学院昆明植物研究所标本馆。

2  提取与分离

大戟脂10 kg，粉碎后用甲醇回流提取3次，减压回收溶剂浓缩得浸膏，将浸膏用水分散，依次用石油醚、醋酸乙酯萃取。醋酸乙酯层（2.3 kg）经过硅胶柱色谱，石油醚-醋酸乙酯（1∶0～0∶1）梯度洗脱，分为7个部分A～G。

E部分（210 g）通过反相C₁₈柱色谱，甲醇-水（3∶7～9∶1）梯度洗脱，得到23个部分E-1～E-23。E-5部分（8 g）经过凝胶（甲醇洗脱）纯化，分为2部分E-5a～E-5b，将E-5b用凝胶（丙酮洗脱）纯化，然后用制备HPLC纯化[乙腈-水（66∶34），体积流量10 mL/min]，得到6个部分E-5b1～E-5b6，其中E-5b6经过硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇（200∶1～50∶1）梯度洗脱，得到化合物2（1 mg）。E-9部分（5 g）经过凝胶柱色谱（甲醇洗脱），再经制备HPLC纯化[乙腈-水（66∶34），体积流量10 mL/min]，得到化合物1（70 mg，t_R＝42 min）。

3  结构鉴定

化合物1：白色无定形粉末。[α]20 D＋16.1°（c 0.1，MeOH）；255；(cm: 3439, 2969, 2935, 2875, 1645,1458, 1373, 1034。由C₃₀H₄₉ClO₃K），确定其分子式为C₃₀H₄₉ClO₃，不饱和度为6。

¹H-NMR数据（表1）显示了三萜特征的8个甲基和1个连氧次甲基氢信号，分别为7个季碳甲基信号 [δ_H 0.73, 0.86, 0.95, 0.97, 1.03, 1.27, 1.29(各3H, s)]，1个仲碳甲基信号 [δ_H 0.84 (3H, d, J = 6.1 Hz)]，和1个连氧次甲基信号 [δ_H3.26(1H, dd, J = 11.6, 4.5 Hz)]。¹³C-NMR结合DEPT谱（表1）显示了三萜的30个碳信号，包括8个甲基碳信号、9个亚甲碳信号、5个次甲基信号（包括1个连氧的次甲基碳信号）、7个季碳信号（包括2个sp²杂化碳信号，1个连氧的季碳信号）和1个羰基碳信号。结合从大戟脂中已报道的三萜，化合物1的四环三萜碳骨架与sooneuphanone D^[13]相同，C-17位侧链与ganoderitriol M^[14]的C-17位侧链仅在C-24位的取代基不同，¹³C-NMR中C-24（δ_C74.5）的化学位移值明显向高场移动δ 5.1，结合质谱显示相对分子质量m/z492，与ganoderitriol M结构中C-24位为羟基取代相对分子质量相差18，所以推断C-24位上的羟基被氯原子取代，并且HMBC谱（图2）中CH₃-26[δ_H1.27(3H, s)]、CH₃-27 [δ_H1.29 (3H, s)] 与C-24 (δ_C74.5)相关证明了以上推断。

H-3 [δ_H3.26(1H, dd, J = 11.6, 4.5 Hz)] 说明3-OH为b构型^[15]。ROESY谱（图3）显示的相关信号有bb，同时缺少CH₃-18和CH₃-21相关，说明化合物1为大戟烷型三萜^[16]。旋光（[α]20 D＋16.1°）也说明了化合物1为大戟烷型三萜^[13,16]。综上所述，将化合物1鉴定为大戟烷-8-烯-3,25-二醇-24-氯-7-酮，经检索为新化合物，命名为euphoritriol A。

MeOH）；201, 253；(cm: 3442, 2968, 2927, 1709, 1657,1584, 1458, 1370, 1114。由HR-ESI-MS m/z 373.274 3 [M＋H]^＋（计算值373.273 7）确定其分子式为C₂₄H₃₆O₃，不饱和度为7。

比较化合物2和1的¹H-NMR和¹³C-NMR数据，¹³C-NMR（表1）显示了24个碳，说明化合物2为降三萜，结构中有2处不同，化合物2的C-17位侧链降解了6个碳，转化为2-羟基乙基取代基。HMBC谱（图2）中CH₃-21 [δ_H1.18 (3H, d, J = 5.1 Hz)] 与C-20 (δ_C 70.9),C-17 (δ_C51.1)相关，H-17 [δ_H1.69(1H ,m)]与C-20 (δ_C70.9), C-21 (δ_C 24.1) 相关证明了2-羟基乙基取代基连在C-17位。另一不同之处为3-OH被氧化为羰基，HMBC谱中谐二甲基CH₃-28[δ_H1.09(3H, s)] 和C-29 [δ_H1.13 (3H, s)] 与C-3 (δ_C 214.5) 相关证明了C-3为羰基。

ROESY谱（图3）显示的相关信号有H-5/CH₃-28、CH₃-29/CH₃-19、CH₃-19/H-6b、CH₃-19/H-11bCH₃-30/H-15b、CH₃-30/H-17、CH₃-18/H-16证明H-5、CH₃-28、CH₃-18为a构型，CH₃-29、CH₃-30为b构型。由于CH₃-21与H₂-16和H₂-12的相关信号重叠，并缺少20-OH信号，所以C-20的构型不能确定^[17]。综上所述，将化合物2鉴定为22,23,24,25,26,27-六降大戟烷-8-烯-20-醇-3,7-二酮，为新化合物，命名为euphoritriol B。

4  讨论

从维吾尔药大戟脂中分离得到2个新的三萜，其中化合物1为新的三萜，化合物2为新的降三萜，并且C-17侧链降解了6个碳，通过核磁数据和质谱数据确定了这2个化合物的结构及相对构型，可通过计算ECD进一步确定化合物1中C-24位的绝对构构型，以及单晶X-射线衍射确定化合物2的绝对构型。大戟属植物白色的乳汁中富有大量的三萜，文献报道从大戟脂中鉴定的大戟烷型和甘遂烷型三萜具有抗肿瘤活性^[8]。本研究从维吾尔药大戟脂中鉴定的2个新的三萜在抗肿瘤方面有潜在的研究价值，为后续活性的筛选提供了物质基础，为药材大戟脂的化学成分提供了理论依据。

利益冲突  所有作者均声明不存在利益冲突

参考文献（略） 

来  源： 赵宁东，宋  玉，杨宝嘉，郝小江，李顺林．维吾尔药大戟脂中2个新的三萜  [J]. 中草药, 2021, 52(3):621- 625.