IEF和IEX-HPLC都可以用来分析单抗的电荷变异体。
IEF机理的主要基于静电荷 pI值,CEX机理的除了pI,电荷分布更加重要,还有几何构象影响与介质的结合。在CEX中能分辨的,CIEF中不一定可以表征。
IEC-HPLC肯定不是net charge,与蛋白表面电荷分布有关,且与IEC填料基质性质有关;相同的net charge,若电荷分布不同,IEC-HPLC可能会表现不一,但IEF表现一致;相同表面电荷分布,相同填料带电基团,但填料基质性质不一,IEC-HPLC也会不一。
未做CPB处理 CEX或CIEF最大的意义在于表征原始样品发酵工艺一致性 。 而CPB处理后,更能透彻表征出其他PTM的比例,K会遮盖某些碱性修饰(若出峰位置一致)。
单抗项目的IEC分离后,基本会对每个峰的组成做一些基本的研究,根据对该项目MOA、CQA的理解,定义主峰。
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