三、原种繁殖培养
将母种接在瓶或袋的木屑培养基上,通过培养,即成原种。
1、原种棉籽壳木屑培养基配方
棉籽壳30kg,木屑50kg,麦麸15kg,复合肥1kg,水135kg。将上述原、辅料混合拌匀,装入750ml的玻璃菌种瓶内,装料要求下松上紧。瓶口塞紧棉花塞,再用牛皮纸包住瓶颈与棉塞。然后置于高压灭菌锅内,在147千帕/cm2压力下灭菌2~2.5小时。也可进行常压灭菌,在100℃下保持10~11小时,达标后趁热取出,让其冷却。
2、接入菌种
待料温降至25℃以下时,在灭菌条件下,将试管种分割成若干块,通过酒精灯火焰迅速接入原种培养基上,每支母种可接4~6瓶原种。
3、发菌培养,去杂选优
接种后及时将玻璃菌种瓶移入25℃菌种培养室内进行培养。空间相对湿度控制在70%以上,避免强光照射。
原种培养时间一般需要30~50天即可。原种培育过程中,要每天进行观察,如发现有杂菌污染的,则应立即淘汰。
四、栽培种扩大培育
1、栽培种制作
栽培种的接种、培养方法与原种相似。就是用原种作菌种扩大。每瓶原种可扩大50~80瓶。原种表面菌膜不能作接种用。在适温条件下培养30~35天即为栽培种,可用于生产栽培。栽培种可用750ml菌种专用瓶。
栽培种接种示意图
2、使用菌种袋制种
由于栽培种使用量大,所以通常多采用聚丙烯菌种袋。袋的规格有14cm ×28cm、17cm×33cm等,可根据各地习惯选择使用。培养基灭菌采用常压灭菌灶灭菌,要求灭菌温度达100℃,保持8~10小时,达标后趁热卸袋冷却。待料温降至25℃以下时,在无菌条件下接入选定品种的原种。每瓶原种可扩接成50~60瓶栽培种。菌种培育室要求干净,防强光,室温掌握在23~25℃。并经常检查,发现杂菌污染应及时淘汰,不断选优去劣。当菌丝长满袋,尖端菌丝反转上爬1~3cm时,为适龄的栽培种。
五、无菌条件下制种
1、接种室的消毒
为减少接种过程的杂菌感染,接种室要在接种前进行消毒灭菌。先把所有接种工具及菌种、待接种的菌棒放入室内,用高锰酸钾、甲醛密闭熏蒸2小时以上。用量为每m3空间5g高锰酸钾、10ml甲醛。为减轻甲醛对身体的影响,熏蒸后放置碳酸氢铵可以驱除甲醛气味。
由于甲醛对人体有害,近年来使用甲醛消毒的越来越少了,很多人选择用气雾消毒剂来消毒。
2、紫外线消毒
紫外线灯照射灭菌就是将灭菌室或接种箱用黑窗帘或黑布遮光(防止光复合),每20m3空间用1支30瓦紫外线灯照射2小时。
3、超净工作台
超净工作台是一种局部净化设备,即利用空气洁净技术,使操作区内的空间达到相对的无尘、无菌状态。使用时,必须放置在洁净的空间。其接种数量不受无菌空间的限制,操作比较简便,可以较大幅度地提高工作效率,适用于大规模生产。为了保证接种成功率,接种时使用酒精灯,效果更好。
4、酒精灯的应用
正常使用的酒精灯火焰应分为焰心、内焰和外焰三部分。近年来的研究表明:酒精灯火焰温度的高低顺序为:外焰>内焰>焰心。一般认为酒精灯的外焰温度最高,其原因是酒精蒸汽在外焰燃烧最充分;但由于外焰与外界大气充分接触,燃烧时与环境的能量交换最容易,热量散失最多,致使最外焰温度有所下降。
很多操作者对酒精灯火焰各部位温度高低常发生误认现象,上述介绍希望对你有所帮助。
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