茶儿茶素对肾炎的药效及其机理研究

【摘要】： 本论文用动物模型和细胞模型研究了茶儿茶素对肾病的药效与药理。首先，研究了茶儿茶素对家兔C-BSA和Masugi两种肾炎模型的药效，及对水负荷家兔肾功能的影响。继而，研究了茶儿茶素对小鼠免疫和炎症的作用，及对氧化应激（H_2O_2、As~(3+)和Cr~(6+)）细胞（正常肾细胞Vero和肿瘤肾细胞786-0）凋亡模型的影响。结果分述如下：1.茶几茶素对家兔水负荷和肾炎模型的作用 药效实验表明，茶儿茶素对水负荷家兔和肾炎家兔有明显的疗效。对于水负荷家兔，茶儿茶素在大（137mg/kg）、中（68mg/kg）、小（34mg/kg）剂量下均有显著的利尿作用，且大、小剂量间差异显著，有明显的量效关系（p＜0.01），利尿峰时为用药后2～2.5h。利尿剂——氢氯噻嗪（5.7mg/kg）的利尿作用弱于大剂量茶儿茶素（p＜0.05），峰时为0.5～1.0h。可见，大剂量茶儿茶素显著增强水负荷家兔肾脏的滤过功能，利尿效果强于氢氯噻嗪，且药效更持久。 茶儿茶素对家兔C-BSA和Masugi两种肾炎模型均有良好的疗效。大（306mg/kg）、中（102mg/kg）、小（34mg/kg）剂量茶儿茶素明显降低尿蛋白、血清肌酐及尿素氮含量（P＜0.05或P＜0.01）；抑制C-BSA肾炎的血清免疫复合物形成（CIC，P＜0.05）；减轻肾小球肿胀、细胞增生、血栓形成及白细胞浸润，修复肾小球病理改变；大、小剂量间差异显著，具有剂量-效应关系。大剂量茶儿茶素的效果强于地塞米松。可见，茶儿茶素明显减轻肾炎的症状。 上述结果表明茶儿茶素在肾病防治中有潜在价值。继而，根据目前关于肾炎的发病机理，研究茶儿茶素对肾病的药理。2.茶儿茶素对免疫和炎症的作用 免疫机理是肾炎的始发机理，控制免疫水平是预防肾炎的重要措施。本课题组以前的研究表明，粗儿茶素或茶提取物对免疫低下的动物（如荷瘤小鼠），表现增强免疫的作用；对于正常小鼠，则增强细胞免疫，而抑制体液免疫。本研究 中茶儿茶素对正常小鼠的兔疫均表现抑制作用。茶儿茶素剂量为 31 omghg、 155mg／kg、77．4mgdig时，明显抑制小鼠血清溶菌酶及腹腔巨噬细胞的活性D O＜00）；抑制小鼠红细胞＊3b受体花环和IC花环的形成O＜0刀5及P＜0刀1）；抑DD 制小鼠总T细胞花环和h花环的形成（P＜0刀1＼大、小剂量间差异显著，存在明DD 显的量效关系。大剂量茶儿茶素明显抑制小鼠脾细胞产生抗体的能力。地塞米松D ①．3＜ghg）对上述免疫指标的抑制效果不及茶儿茶素…功刀5）可见，茶儿茶D 素显著抑制小鼠的非特异性免疫和特异性免疫；且其抑制效果优于地塞米松。DD 用角叉菜胶致大鼠足路炎性肿胀法和纸片肉芽肿法研究大、中、小剂量D 份omghg、180mghg、90mg／kg）茶儿茶素的抗炎作用。结果，茶儿茶素剂量依D 赖性地抑制角叉菜胶诱发的大鼠急性炎症，大剂量茶儿茶素效果优于阿司匹林。DD 对于纸片所致的肉芽肿亚急性炎症，只有大剂量茶儿茶素才有抑制作用，且效果DD 不及地塞米松。可见，茶儿茶素显著抑制急性炎症模型，而对亚急性炎症模型的Dl 以比几、As‘“和 Cr’”应激建立细胞凋亡模型。MTT测定结果显示：H，0，、As‘“和 lICr”呈时间和剂量依赖性抑制细胞活力，三者对 Vero细胞的半抑制浓度（IC。。）l 分别为178．spM、155．6pM和9．SUM；对786－0细胞的IC。。分别为125．6pM、77．spM 和 8．6pM。H＊（50pM／24h）、As‘”（80pM／24h）、Cr’”（ZUM／24h或 400pM／Zh）分l 别应激处理 Ve。o和 786－0细胞，24h后，荧光显微镜、流式细胞仪和 DNA电泳 ll 检测，发现细胞 DNA和 RNA凝聚浓缩，进而产生凋亡小体，出现典型的 G－1亚峰 ll 及 DNA梯形条带。可见，以上氧化应激诱导细胞了凋亡，借此氧化应激细胞凋亡 lD 模型进行以下研究。Dl 茶儿茶素及其单体对VerO细胞和786－0细胞的毒性实验表明，低浓度促进细l胞生长，高浓度抑制细胞活力，茶儿茶素、EGCG、ECG、EGC对Vr细胞n。nD 分别为：233卜合1、17工lpg／nil、136．3pg／nil和112．spg／ffil：对旭6－0的1Q。分 别为：Zm．7卜咖二134．印咖L 11O．sll咖1和98．叫咖1。茶儿茶素及其单体对D 两种细胞的毒性大小为：茶儿茶素＜＊＊＊＊、＊＊G＜＊＊G，786－0细胞的毒性敏感性Dl 大十VeO细M。l121l 根据 IC。。，在非毒性浓度范围研究茶儿茶素及其单体对应激细胞凋亡模型的 l影响。结果：叨V钉ml茶儿茶素显著抑制几A和k’”应激诱导的W＊细胞凋亡，l 但对同样应激引起的 786—0细胞凋亡没有保护效果。另外，茶儿茶素对 AS‘”诱导