内容纲要
1.血涂片的制作
2.血液棕黄层涂片的制作
3.血清和血浆样本的制作
4.细胞学采样操作
5.组织病理样本的采集
6.尿液的实验室检查
1.血涂片的制作
目的：
A.进行人工白细胞分类计数。
B.检查红细胞的异常形态和结构（例如：红细胞大小不均，球形红细胞，靶形红细胞，影红细胞，Heinz小体等）。
C.检查白细胞形态的异常（例如：中毒性白细胞，核左移，低分化的白细胞等）。
D.检查血液寄生虫（例如：巴贝斯虫，心丝虫微丝蚴等）。
E.进行血小板人工计数，判断血小板计数值准确与否，检查血小板有无形态异常（巨型血小板）。
所需器械和设备：
A.有EDTA抗凝剂的血液采集管（真空或是非真空）。B.载玻片。C.显微镜。D.血液比容毛细管或是10-100微升加样枪。E.记号笔或是标签纸。
操作规程：
A.使用血液比容毛细管或是10-100微升加样枪从采血管中吸取血液，滴加10-30微升抗凝全血至载玻片靠近某一末端的中心线位置。
B.使用拇指和中指握持住另外一张载玻片的一端，食指按压在载玻片之上。将此用于推片的载玻片（推片）的末端平稳放置在滴加有血液的载玻片上。
C.平稳的将用于推片的载玻片按照与滴加有血液的载玻片呈20-30度的角度的方向向后拉动，直至两个玻片的接触部分和滴加的血液液滴均匀接触。
D.停留5秒，直至血滴均匀扩散至推片与载玻片接触的整个边缘后，平滑并快速的向前推动推片，直至可见血液涂层上形成具有“羽状缘”形状的末端。
E.放置风干后进行染色。在染色前使用记号笔或是标签纸在玻片上标记病畜和涂片信息（病畜名，采样时间等）。
2.血液棕黄层涂片的制作
目的：
A.检查红细胞寄生虫。B.评估白细胞形态。C.检查血液中细菌存在与否。
所需器械和设备：
A.含有EDTA抗凝剂的血液采集管（真空或是非真空）。B.载玻片。 C.显微镜。D.血液比容毛细管（附带封管用的胶泥）。E.血液比容毛细管离心机。F.止血钳。
操作规程：
A.使用血液比容毛细管从抗凝采血管中吸取血液，吸取血液超过比容管2/3容积后将吸取血液的一段插入胶泥中以封闭管口。
B.将一端已用胶泥封口后的血液比容毛细管放入血液比容毛细管离心机中，按照12000-15000转/分钟的速度离心5分钟。
C.离心结束后，取出血液比容毛细管，食指按压住没有密闭的一端，使用砂轮和止血钳折断带有胶泥一端的血液比容毛细胞。放松按压没有密闭一端的食指，可见血液从折断的一端流出，待红细胞层几乎流尽，血液棕黄层开始流出时，将血液棕黄层的样本滴加至载玻片上。
D.使用拇指和中指握持住另外一张载玻片的一端，食指按压在载玻片之上。将此用于推片的载玻片（推片）的末端平稳放置在滴加有血液棕黄层液滴的载玻片上。
E.平稳的将用于推片的载玻片按照与滴加有血液棕黄层液滴的载玻片呈20-30度的角度的方向向后拉动，直至两个玻片的接触部分和滴加的血液棕黄层液滴均匀接触。
F.停留5秒，直至血液棕黄层液滴均匀扩散至推片与载玻片接触的整个边缘后，平滑并快速的向前推动推片以形成单层的血液棕黄层涂片。
G.放置风干后进行染色。在染色前使用记号笔或是标签纸在玻片上标记病畜和采样信息（病畜名，涂片时间等）。
3.血清和血浆样本的制作
目的：
根据不同的检测项目，从血液将细胞成分和液体成分分离，以在避免细胞成分干扰的情况下对血液中的不同生化成分进行检测。
所需器械和设备：
A.不含抗凝剂的采血管（真空或是非真空）。B.含有EDTA或是肝素。C.血液比容毛细管或是10-100微升加样枪。D.离心机和离心管。E.巴氏吸管或是2ml注射器。F.记号笔或是标签纸。
操作规程：
血清
A.将血液样本放入没有凝血抑制剂的采血管中。
B.静置30-60分钟以待血液凝集。
C.从采血管的边缘移除凝血块。
D.以3000转/分（rpm）的速度离心10分钟。
E.吸出血清，将其放入另外一个干净，无抗凝剂的采血管或试管中（如是使用带有分离凝胶的血清采血管，待血液凝集后直接离心即可。）
F.在装有血清的采血管或是试管上标注病畜和采样信息（病畜名，检测项目，涂片时间等）。
血浆
A.将血液样本放入有抗凝剂（肝素，EDTA，柠檬酸盐）的采血管中。
B.在采血后立即进行离心（3000转/分，10分钟）--离心前确定已经对离心的样本进行了配平操作。
C.吸出分离出的上层血浆，将其放入另外一个干净，无抗凝剂的采血管或试管中。
D.在装有血清的采血管或是试管上标注病畜和采样信息（病畜名，检测项目，涂片时间等）。
4.细胞学采样操作
目的：
采集在体腔液体或是包块及脏器组织中的部分细胞，在染色后观察细胞的特征，以求判定肿瘤的类型。
所需器械和设备：
A.注射器（5ml）。B.针头（22G或7号），多种长度。C.载玻片。D.显微镜。E.酒精棉球。F.超声仪器（备用）。G.剪刀或是剃毛器（备用）。H.记号笔或是标签纸。
操作规程：
细胞学采样操作
A.如果是比较安静的动物，或是只是对体表的包块进行采样，那么可以只是在保定或轻度镇静的情况下进行操作即可。
B.如果是对腹腔的肿块或器官进行采样，或是在对疼痛敏感的区域（例如面部）进行采样，那么就需要进行深度镇静或是全身麻醉后才能进行操作。
C.动物保定的位置要尽量保证要采样的部位在最上方以便操作。
D.对要采样的部位使用酒精棉球或是其他消毒措施进行消毒（如果有必要可剃毛）。
E.对于体表的包块，使用一只手固定住包块，另外一只手持带有针头的注射器末端插入肿块之中，待确定针尖在肿块之中后，向后回抽针筒，待针筒回抽至1/2至2/3位置后，维持住这个抽吸力量，保持针尖在肿块中，并前后移动3-4次针尖，然后再松开活塞，让活塞自动由于负压的作用回退后，拔出采样针头。然后取下针头，注射器中活塞回抽满空气，再连接上采样的针头，将样本喷出至载玻片上。
或是样本中有大量液性成分（血液，渗出液等），或是细胞很脆弱（例如淋巴细胞），使用抽吸的方法采样会导致抽吸出很多液性成分导致无法判读或是会造成细胞的破碎，对于这样的情况，可以使用无抽吸作用的细针采样方法：用一只手固定住肿块后，另外一只手直接握持不带注射器的针头或是使用连接在已事先抽好5ml空气的注射器的针头，穿刺进行肿块之中，前后进针采样3-5次，然后可以直接拔出针头，将采集到的样本喷出至载玻片上。
细胞学涂片的制作
a. 玻片按压推拉法
-将采到样本喷出至一张载玻片中央部分。
-将第二张载玻片水平或是垂直放置到第一张带有样本的载玻片上，利用第二张载玻片本身所具有的重力使样本扩散开来。
-平滑并轻柔的拉动第二张载玻片，使本来已由于重力作用扩散开的样本分布到两张玻片之上（注意拉动时不要额外施加垂直方向的压力，以防止细胞在拉动的过程中破碎。）
-在染色前使用记号笔或是标签纸在玻片上标记病畜和采样信息（病畜名，采样部位，涂片时间等）。待样本完全干燥后使用瑞氏染液或是Diff Quik染液进行染色。
b. 血涂片浓集技术
如果样本中液性成分较多，而且含有较多量的细胞，则可使用这种方法制作涂片。
-将采到的细胞学液体样本滴至载玻片靠近某一末端的中心线位置上。
-使用拇指和中指握持住另外一张载玻片的一端，食指按压在载玻片之上。将此用于推片的载玻片（推片）的末端平稳放置在滴加有样本的载玻片上。
-平稳的将用于推片的载玻片按照与滴加有样本的载玻片呈20-30度的角度的方向向后拉动，直至两个玻片的接触部分和滴加的样本液滴均匀接触。
-停留5秒，直至样本液滴均匀扩散至推片与载玻片接触的整个边缘后，平滑并快速的向前推动推片。
-待推片前进至玻片2/3部位时，停止推片，直接向上提起推片，以便让较多液体样本停留在这个拿开推片的部位。
-放置风干后进行染色。在染色前使用记号笔或是标签纸在玻片上标记病畜和涂片信息（病畜名，采样部位，采样时间等）。待样本完全干燥后使用瑞氏染液或是Diff Quik染液进行染色。
c. 海星涂片
如果采集到的样本过少，可以使用这种技术制作供以判读的玻片
-将样本喷出至载玻片的中央部分
-使用注射器针头将样本轻轻的向各个方向推动涂开。
-放置风干后进行染色。在染色前使用记号笔或是标签纸在玻片上标记病畜和涂片信息（病畜名，采样部位，采样时间等）。待样本完全干燥后使用瑞氏染液或是Diff Quik染液进行染色。
5.组织病理样本的采集
目的：
采集并保存用于送检进行组织病理学检查的样本
所需器械和设备：
A.套管活检针（14G或是16G）。B.活检打孔器（直径1mm-8mm）。C.酒精棉球。D.手术刀片。E.手术剪。F.皮肤缝合器或是三棱针和合成可吸收缝线。G.装有10%福尔马林液体的样本保存瓶。H.记号笔或是标签纸。
操作规程：
A.套管针活检
对于不希望进行侵袭性较大的检查的病例，使用针刺活检采集组织进行组织学检查就能在侵袭尽可能少的情况下得到尽可能准确的诊断结果。对于上皮性的肿瘤，使用这种方法采样进行组织病理学检查的结果同手术切除后进行组织病理学检查的结果完全一致，而对于间质性的肿瘤，这种方法采样的结果同手术切除后病理检查结果的一致性为94%。
-准备恰当的活检针：一般推荐使用14G或16G的套管针进行活检采样，也可以使用商业化的一体化的自动活检针进行采样（自动活检针的采样操作方法视不同品牌的自动活检针不同而不同）。
-进针：一般仅仅进行镇静或是局部麻醉就足以满足采样的要求，但是如果是对深层的肿瘤进行采样，或是动物不够配合，那么就需要进行全身麻醉才能够达到采样的要求。进针部位按照手术消毒的原则进行的消毒刷洗。如果采样的肿瘤不是位于皮肤表面，或是位于组织深处，那么可以使用手术刀切开表层后再进针采样。保持套管针为闭合状态进针，待针头进入肿瘤中后维持外层套管针不移动，套管内针继续向前，此时肿瘤组织则会由于组织的挤压作用而突出进入套管内针的采样凹槽中。
-保持套管内针不动，向前移动套管外管针，由于套管外针管壁的切割作用，突出陷进如套管内针采样凹槽中的组织样本就会被切割进入套管针管内。
-套管针达到闭合状态后整个套管针一起回退，组织样就会保留在针管内一起退出。
-取出套管针后向前推动套管内针，暴露出位于套管内针凹槽内的样本，就完成一次完整的采样操作。如果有切开皮肤，可使用间断结节缝合闭合皮肤的切口。
B．打孔活检
可选用直径从1mm至8mm大小的皮肤打孔活检器进行这样的活检操作。对需要进行采样的部位进行局部麻醉（选择活检的部位都要在之后会进行的手术的切除范围内），或是给予病畜相应的镇静药物。不过如果是皮肤浅表层已经破溃的肿瘤病变，可能不需要进行麻醉或镇静操作就可直接采样。如果要采样的肿瘤位于皮下或是组织深部，则要先用手术刀切开皮肤或组织后，再固定好肿瘤组织并刺入打孔活检器进行采样。
-选择打孔采样部位。
-使用纱布清洁表面血液或是其他杂质。
-打孔器垂直按压在采样部位上，顺时针旋转打孔器，同时向下施加压力。
-如果肿瘤团块质地比较致密，可能需要前后反复旋转刺入数次。
-待打出的孔洞与周围组织分离后，可使用无齿组织镊轻轻夹住并提起组织。如果组织不易脱离，可使用剪刀或是手术刀从活检样本的基部切断组织连接处，从而取出活检组织。
-大部分的采样后部位，使用纱布进行短时间压迫止血即可。皮肤和组织的切口进行简单的间断结节缝合即可。
C．楔形活检
对于纤维化病变比较严重的组织，这样的活检方法能够取得更利于进行病理判读的样本，而且这样的楔形切口有利于创口的愈合。
-使用纱布清洁活检采样部位表面的血液或是其他杂质。
-按照与采样部位的垂直轴成30度-60度角度的方位，在垂直轴的左右两边使用手术刀片切开。
-左右两边都完成切割后，可使用无齿组织镊轻轻夹住并提起组织。如果组织不易脱离，可使用剪刀或是手术刀从活检样本的基部切断组织连接处，从而取出活检组织。
-使用纱布进行短时间止血。使用合成可吸收缝线进行简单的间断结节缝合。
D．切除活检
将病变部位全部切除，并放置进入福尔马林溶液中进行固定保存送检。
6.尿液的实验室检查
目的：
取得相关的尿液参数指标来评估病畜的泌尿生殖道状况。
所需器械和设备：
A.使用膀胱穿刺或是导尿管。B.折光比重计。C.尿液干化学试纸条和比色板。D.蒸馏水。E.离心机。F.注射器。G.载玻片和盖玻片。H.显微镜。I.纸巾或擦镜纸。
操作规程：
A．尿比重
尿液的比重应该使用折光比重计进行测量，而不能使用干化学试纸条，因为干化学试纸条测定的结果并不准确。
-打开比重计的棱镜盖板。
-滴加一滴蒸馏水至棱镜上，检查比重读数，该读数应该是1.000，如果不是，应该旋开校准螺钉，旋转螺钉，直至比重计读数回归到1.000为止。
-滴加尿液样本至棱镜上，水平持握折光比重计，对准明亮的光源（自然光源最佳），判读折光比重计的读数。
-使用后，使用润湿的纸巾或是擦镜纸清除干净棱镜和棱镜盖板。
B．尿液干化学试纸条测试
尿液干化学试纸条能够对很多尿液指标作出定性或是半定量的检测结果。但是因为现在的尿液试纸条的检测都是为人的尿液所设计，因此对于测定动物尿液中的一些指标（比重，亚硝酸盐，白细胞和尿胆素原）的结果并不可靠。
-将试纸条浸入新鲜尿液中，然后取出滴掉在试纸条上多余的尿液（手指绝对不能接触试纸条条的反应面）。
-或者也可使用注射器将尿液滴到试纸条上的每个反应面上。
-在规定的时间内检查反应面上的颜色变化，并同比色版进行比较。
C．尿液沉渣检查
-使用新鲜尿液，如果使用冷藏后的尿液，应该待其回复到室温后再进行检测。
-轻柔的混合尿液样本，以防止破坏任何可能存在的管型。
-将10ml或5ml或是3ml的尿液放入离心管中（猫一般用3ml）。
-按照1000转/分钟的速度离心5分钟。
-倒去离心后的上清液（该上清液可以用于测量尿液比重）。
-倒去上清液后，离心管中会有剩下的部分少量上清液，可以用于测量尿液比重的测试。
-可以通过轻弹离心管底部或是使用移液管吸取来混匀尿液沉淀。
-使用巴氏试管或是移液管吸取10微升尿液沉淀，滴放在载玻片中央，在其上放置盖玻片。
-将其放置在显微镜的载物台上，旋低聚光器，在10倍物镜下观察整张玻片。
-在10倍物镜的放大倍数下辨别尿液结晶的数量和类型。
-转换到40倍物镜下，在这个放大倍数下对尿液沉淀进行观察，记录下每个视野中可见的红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、结晶和细菌的数量。如果这些成分的数量不多，可计数5-10个视野后计算平均数量。
-观察并记录在除上述成分之外，是否可以看到精子，粘膜，酵母菌，真菌，线虫虫卵，脂肪滴等。
-如果要进一步鉴别细菌和微粒，可以使用100倍油镜进行观察。可以旋转细准焦螺旋和移动聚光器来辨别脂肪滴和气泡。
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