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内毒素检测及临床意义 | 今日技能

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什么是内毒素?

细菌内毒素,又被称为“热原”,是革兰氏阴性菌细胞壁上的特有结构,在细菌存活状态时不释放出来,只有当细菌死亡自溶时才释放到细胞外,表现出多种毒性作用,为区别于外毒素而称为内毒素。细菌内毒素是由脂多糖(LPS)、蛋白质和磷脂组成的高分子复合物,发挥毒性的成分主要为类脂质A(Lipid A)。类脂A是LPS活性不可缺少的部分, 可视作LPS 的“生物活性中心”。内毒素位于细胞壁的最外层、覆盖于细胞壁的黏肽上。各种细菌内毒素的毒性作用较弱,大致相同,可引起发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等。内毒素耐热而稳定,抗原性弱。可刺激机体产生抗体,但无中和作用,可形成抗毒素,经甲醛处理不能成为类毒素。

内毒素(endotoxin,ET)是构成革兰阴性细菌细胞壁外膜最外层的脂多糖 ( LPS) 成分,其基本结构高度保守,由O-特异性侧链、核心多糖和类脂 A(lipid A)组成。(如图1)

图1 内毒素的多糖结构


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内毒素与外毒素有哪些区别?

内毒素的活性中心是类脂 A,是已知最强的免疫刺激物之一。可通过刺激单核细胞和巨噬细胞,使其产生白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子(TNF)、干扰素(IFN)、巨噬细胞炎症蛋白-1(MIP-1)、白细胞致热源(LP)等炎症介质和细胞因子。内毒素的生物活性很广泛,主要通过与靶细胞作用而诱导这些细胞产生一系列炎症介质和细胞因子表现出来的,可引起发热反应,促进前列腺素合成,促使血管活性物质的释放,降低血压,激活凝血系统和补体,引起局部过敏,影响或参与免疫反应,影响血糖及肿瘤坏死等,严重的甚至会致死。

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内毒素检测与微生物培养的比较

细菌培养是循证感染医学中细菌感染性疾病病原学检查的“金标准”。细菌培养在临床疾病诊断及使用抗生素治疗的过程中具有重要的意义,具有一定的不可替代性。然而,由于传统的细菌培养及鉴定时所受的制约条件较多,如标本采集质量、运送条件、接种方法、培养环境、鉴定方法等,导致阳性率不高,并且常用细菌培养的一大弊端就是培养及鉴定时间过久,以至于延误临床诊断,会导致严重不良后果。然而随着内毒素检测的逐渐推广,这一问题得到一定程度的缓解。

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内毒素的检测方法有哪些?

目前内毒素测定方法有:

① 鲎试验法,该法是目前最主要也是最为经典的内毒素检测方法,也是现在内毒素检测的金标准。鲎试剂中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等,利用与内毒素发生凝集反应产生凝固蛋白(凝胶)的原理来定性检测或半定量测定内毒素。凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。此法操作比较简单,经济,不需要专用测定设备,可以进行定性或半定量测定。

② 脂多糖(LPS)生物学标记的探测分析法,虽然此类方法能够检测出样品中LPS的种类并且能敏感地检测出样品中LPS的浓度,但是仍然不能准确地检测出有生物学作用的内毒素浓度。

③ 酶联免疫吸附试验(ELISA),是目前新兴的内毒素检测方法, 它是基于抗原抗体的酶联免疫测定法,由外加热原质刺激巨噬细胞后产生的内热原物质如肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素1(IL-1)等而进行测定的。

④ 生物传感器检测法,生物传感器也是目前新兴的内毒素检测方法,大部分仍是基于鲎试验法中鲎阿米巴法溶解产物与内毒素的LPS的凝结反应。该类检测法具有测量速度快、敏感性高、最低检测限低等特点,目前,国内外有较多探讨生物传感器检测内毒素的研究。 

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内毒素检测在诊断中的意义

1.可用于革兰阴性菌脓毒症的诊断:通过测定人血浆中的内毒素可对G菌所引起的临床脓毒症进行辅助诊断,作为一个急性重要参数用来鉴别细菌性和非细菌性感染和炎症。

2.内毒素可以作为一个衡量病情严重程度和判断预后的一个参考指标,例如评价腹膜炎、脓毒症、SIRS和MODS等的疾病临床进程。内毒素的定量检测,可作为指导临床治疗、判断疗效和筛选恰当药物的一个指标。

3.外源性输注的内毒素血症的诊断:当引起不明原因发热时,通过测定输入的液体、药物或血液,看内毒素是否异常,以排除外源性输入感染可能。

文章转载自急诊时间(刘铮医生个人公众号)

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