白僵菌是一种子囊菌类的虫生真菌,主要种类包括球孢白僵菌和布氏白僵菌等,常通过无性繁殖生成分生孢子,菌丝有横隔有分枝。白僵菌可以侵入6个目15科200多种昆虫、螨类的虫体内大量繁殖,同时产生白僵素(非核糖体多肽类毒素)、卵孢霉素(苯醌类毒素)和草酸钙结晶,这些物质可引起昆虫中毒,打乱新陈代谢以致死亡。其中,球孢白僵菌为子囊菌类的真菌,可工业化培养生产,人们利用其产生的分子孢子可加工成微生物杀虫剂。
在害虫病原微生物中,因真菌致病的最多(细菌,病毒),居60%以上,而在昆虫的真菌病中,由白僵菌引起的占20%以上。可见,白僵菌是昆虫重要的病原菌之一。白僵菌在世界分布极广,欧、亚、非、澳、南北美洲都有,就国家来说有20-30个。白僵菌的寄主范围很广,主要寄生于鳞翅目、同翅目、膜翅目、直翅目等的200多种昆虫和螨类,而且致病力强,可用于防治松毛虫、玉米螟、大豆食心虫、高粱条螟、甘薯象鼻虫、马铃薯甲虫、茶叶毒蛾、松针毒蛾、稻苞虫、稻叶蝉、稻飞虱等害虫,具有使用方便、对人畜安全、不污染环境、不杀害天敌、经济有效等优点,已成为我国防治森林害虫的主要微生物杀虫剂之一。
一种杀虫白僵菌菌粉的工业化生产方法,其应用了一种杀虫白僵菌菌粉的培养基,该培养基包括斜面培养基、二级液体扩大培养基、三级固体扩大培养基;所述斜面培养基的组成成分以重量百分数计分别为:马铃薯20%、白砂糖1%、琼脂1%、水78%;所述二级液体扩大培养基的组成成分以重量百分数计分别为:黄豆粉1%、玉米粉1%、白砂糖1%、尿素0.02%、蛋白胨0.02%、磷酸二氢钾0.02%,水96.94%;所述三级固体扩大培养基的组成成分以重量百分数计分别为:麦麸60%、谷壳40%;所述黄豆粉、玉米粉的粒度为300-500目;所述马铃薯的制备方法为先将马铃薯去皮,再切片煮30min,过滤得到;
具体包括以下步骤:
步骤1、斜面菌种培养:取马铃薯、白砂糖、琼脂、水按比例混合制得斜面培养基,将以白僵虫为标本,不断的分离提纯而获得的原菌种放入斜面培养基接种,接种后的斜面培养基放入22℃恒温箱内培养,第1-2天着重检查有无细菌生长,如见斜面上有粘稠具光泽的薄膜出现即为细菌污染,应去掉,继续观察有无细菌生长,如有则重复上述操作至第15天,如无其他杂菌,则第一批斜面菌种制备完成;所述制备斜面菌种的批数是根据生产量而定的,每批的生产量在10吨以上;
步骤2、二级液体扩大培养:取黄豆粉、玉米粉、白砂糖、尿素、蛋白胨、磷酸二氢钾、水按比例混合制得二级液体扩大培养基,将配好的二级液体培养基装入容量为1000L的三角瓶内,装量为三角瓶容量的1/3,塞好瓶塞,高压灭菌,在无菌条件下每瓶接种一支试管步骤1制得的斜面菌种,接2瓶,接种后的二级液体扩大培养基置于往复式摇床上震荡10h,温度控制在22℃,频率80次/min,用电子显微镜检测孢子发芽率在85%以上即可做为二级液体菌种;
步骤3、三级固体扩大培养:取麦麸、谷壳按比例进行混合均匀制得三级固体扩大培养基,将5kg三级固体扩大培养基装入布袋或纤维袋,扎紧袋口置于灭菌锅炉中消毒,灭菌后的三级固体扩大培养基按20%的接种量加入步骤2制得的二级液体菌种,培养室及用具彻底消毒后,将接种后的三级固体扩大培养基平铺在簸箕内,厚度为0.6寸,进行浅盘发酵制得白僵菌;所述培养室及用具彻底消毒的步骤为:将用具在接种前洗净晾干放入培养室,然后将培养室用硫磺或40%的甲醛熏蒸;所述浅盘发酵的具体步骤为:第1-5天内温度控制在22℃,当温度达到26℃时,打开窗门或用风扇进行降温至20℃,共计浅盘发酵15天;
步骤4、干燥、粉碎:将步骤3制得的白僵菌经烘干、粉碎由输送带输入储存罐中,再进行包装,贮存;所述烘干操作在烘干房中进行,烘干房采用煤炉、电炉、暖气片加温,烘干温度30℃,烘干时间3天;粉碎收集时,白僵菌粉的细度在40目筛以上,待储存罐收有的菌粉含孢量为100亿/g时,将菌粉分袋包装,此时菌粉的活孢子率在85%以上。
[1] 刘银泉, 冯明光, & 刘树生. (1999). 球孢白僵菌对桃蚜的毒力测定. 植物保护学报, 26(4), 347-352.
[2] 孙继美, 丁珊, & 肖华. . 球孢白僵菌防治松褐天牛的研究. 中国森林病虫, 000(003), 16.
[3] 刘健, 陈洪章, & 李佐虎. (2003). 白僵菌杀虫剂生产工艺研究状况与展望. 中国生物防治学报, 19(2), 86-90.
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