蔡正华*，赵伟，陈佳磊
（南通市第一人民医院神经外科，江苏 226001）
[摘要] 目的：探讨UCA1在神经胶质瘤组织中的表达及其与临床预后的关系。方法：实时荧光定量PCR法检测64例神经胶质瘤组织（WHOⅠ～Ⅱ级22例，Ⅲ～Ⅳ级42例）及10例对照正常脑组织中UCA1mRNA的表达，分析其与神经胶质瘤患者临床病理特征及预后之间的关系。结果：神经胶质瘤组织中UCA1mRNA的表达水平明显高于对照正常脑组织（P＜0.001）；UCA1的表达与患者的WHO分级明显相关（P＜0.05），而与患者的年龄、性别、肿瘤大小和KPS评分等无关（P＞0.05）。结论：lncRNA UCA1与胶质瘤恶性程度及预后密切相关，可能成为胶质瘤预后判断的一个独立因子及治疗新靶点。
[关键词] 胶质瘤；长链非编码RNA；尿路上皮癌胚抗原1；预后
在人类的整个转录组中，长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是最重要的一个组分，长度一般都超过200nt，最主要的特征是缺少开放读码框，而且无法进行蛋白的编码，但是通过转录前、转录后和表观遗传学等多个阶段对靶基因进行调控，从而维持正常基因遗传功能[1]。当前研究发现，如今流行的多种肿瘤及非肿瘤疾病都与lnc RNA的异常表达直接相关。虽然有人试图通过分子靶点技术来解决这些困扰人们多年的疾病，但是相关的研究非常的少。
尿路上皮癌胚抗原1（urothelial carcinoma antigen 1，UCA1）是借助克隆技术从膀胱癌中变异细胞采取的lncRNA，其长度为1 439 bp。这类基因在胚胎组织中的活性非常高，在成体组织中很少表达，但在膀胱癌、卵巢癌等肿瘤组织中高表达[2]。UCA1在舌鳞状细胞癌、黑色素瘤、食管癌、肝癌和结直肠癌等消化道肿瘤中发挥致癌基因作用[3-7]，但UCA1在神经胶质瘤中的相关研究很少。在本文采用RT-qPCR技术对64例神经胶质瘤患者肿瘤组织及10例对照正常脑组织中UCA1mRNA的表达进行检测，研究UCA1mRNA表达与胶质瘤重要临床病理特征的关系，为胶质瘤的分子靶向治疗提供实验依据。
1.1 材料与试剂收集我科2012年1月～2016年6月64例初治神经胶质瘤患者手术切除的肿瘤组织（WHOⅠ～Ⅱ级22例，WHOⅢ～Ⅳ级42例）及10例脑外伤颅脑减压手术后正常脑组织标本。获取样本后，快速置于液氮保存，储存温度-80℃。本次实验已获得我院伦理委员会的批准，所有患者对整个手术非常了解。试剂与设施：Trizol试剂等（上海吉玛制药技术有限公司）；RIPA裂解液、5×SDS-PAGE上样缓冲液和BCA蛋白浓度测定试剂盒（碧云天生物）。ABI 7500实时荧光定量PCR仪（美国Life Technologies公司）。
1.2 RT-qPCR方法使用Trizol试剂提取组织或培养细胞的总R NA。按照RNA荧光试剂的使用说明进行操作，将合成的cDNA作为模版进行qPCR反应。整个反应过程如下：模板cDNA 2μL，2*SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ10μL加入0.8μL UCA1正向引物（5′-ACGCTAACTGGCACCTTGTT-3′），反向引物（5′-TGGGGATTACTGGGGTAGGG-3′），添加无菌蒸馏水至最终体系体积为20μL。以GAPDH作为内参基因，GAPDH正向引物：5′-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3′，反向引物：5′-GAAGATGGTGGGATTTC-3′。整个过程中必须要保证恒温环境，各个环节的处理温度与时间分别为95℃5s，60℃15s，最后，一共循环操作45次。
1.3 统计学处理采用SPSS 20.0统计学软件分析处理数据。不同组间的数据通过t检验来对比分析，多个组分间通过单因素方差来分析。生存分析采用Kaplan-Meier生存曲线，采用差异log rank test比较各组生存时间差异。以P＜0.05为有统计学意义。
2.1 胶质瘤组织和正常脑组织中UCA1表达相对于正常脑组织，胶质瘤中UCA1表达量明显上调，且高级别胶质瘤（WHOⅢ-Ⅳ级）UCA1表达明显高于低级别胶质瘤（WHOⅠ-Ⅱ级）。见图1。
图1 胶质瘤和正常脑组织UCA1表达
2.2 UCA1表达与胶质瘤患者临床病理特征关系以UCA1相对表达量的中位值（22.201）为界，≥22.201为高表达组，＜22.201为低表达组，结合患者的临床病理特征进一步分析。结果显示，UCA1表达的高底与患者性别、年龄、肿瘤直径、KPS评分、肿瘤部位无关（P＞0.05），而与肿瘤分级有关，WHOⅢ～Ⅳ级患者高表达率高于Ⅰ～Ⅱ级患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。
表1 UCA1表达与患者临床病理特征的关系
临床参数性别临床参数男女年龄肿瘤直径WHO分级KPS评分肿瘤部位＜40≥40＜5cm≥5cmⅠ～ⅡⅢ～Ⅳ＞80≤80额部颞部UCA1表达N低表达高表达χ2值P值35 19 16 0.567 0.451 29 13 16 25 13 12 0.066 0.798 39 19 20 39 21 18 0.591 0.442 25 11 14 22 16 6 6.926 0.008 42 16 26 34 19 15 1.004 0.361 30 13 17 21 11 10 0.071 0.79 43 21 22
2.3 UCA1表达与胶质瘤患者的生存期分析生存分析结果显示，UCA1表达与胶质瘤患者预后密切相关，UCA1高表达患者具有更差的预后（HR= 7.368，95%CI=3.032～17.90，P＜0.001），见图2。
图2 UCA1表达与胶质瘤患者预后的关系
神经胶质瘤是神经系统最为常见的恶性肿瘤之一，具有高复发率、高死亡率等特点。目前胶质瘤的治疗仍然是以手术为主，辅助放化疗的综合治疗模式。近年来虽然胶质瘤治疗取得一定的成就，但实际效果并不能持久，预后改善不显著[3]。造成这种困境的主要因为肿瘤细胞增殖迅速，病变进展快，仅仅依靠手术切除不能达到根治的目的[4]。所以人们将更多的关注集中于分子靶点治疗，希望通过这种方式进一步提高治疗质量。
随着医学技术的不断发展与人们关注度的不断提高，越来越多的国内外学者致力于非编码R NA技术的研究，试图将其作为治疗肿瘤的有效方式。本研究利用荧光定量PC R技术证实UCA1在高级别胶质瘤中高表达，并与胶质瘤患者更差的预后密切相关，表明UCA1可能是胶质瘤恶性程度和预后判断的一个良好指标，可能在神经胶质瘤的发生和发展中发挥癌基因的作用。先前的研究表明UCA1在膀胱癌，胃癌，舌鳞状细胞癌、黑色素瘤、食管癌、肝癌、结直肠癌、胰腺癌、乳腺癌，卵巢癌等肿瘤组织中存在异常表达[5-9]。研究发现，UCA1除与胃癌患者的预后及肿瘤恶性程度相关外，其还与胃癌耐药有关，从而影响胃癌的预后[10]。多项研究报告UCA1基因在黑色素瘤中高表达，尤其是进展期。UCA1在黑色素瘤中高表达，疾病晚期比早期表达更高；在有淋巴结转移的黑色素瘤病例中，转移灶比原发灶有更高的UCA1表达[11]。通过在体外将患者的UCA1基因敲除可有效的减缓黑色素瘤细胞的迁移，提示UCA1基因的高表达与黑色素瘤的转移有关。因此，UCA1参与肿瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等各个环节。
综上所述，本研究结果显示，UCA1在神经胶质瘤组织中表达上调，且与患者的肿瘤恶性程度和预后密切相关，表明UCA1可能作为判断胶质瘤恶性程度和患者预后的有效生物学标志物，然而UCA1在神经胶质瘤中发挥相关生物学功能的精确作用机制尚待进一步研究。
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The expression of lncRNA UCA1 in glioma and its effect on the Prognosis of glioma
CAI Zhenghua,ZHAO Wei,CHEN Jialei
(Department of Neurosurgery,the First People’s Hospital of Nantong,Jiangsu 226001)
[Abstract] Objective:To discuss the expression of lncRNA UCA1 in glioma and its effect on the Prognosis of glioma.Method:LncRNA UCA1 expressions in 64 glioma samples(GradeⅠ～Ⅱin 22 cases and GradeⅢ～Ⅳin 42 cases, according to WHO criteria)and 10 normal brain samples were detected by using real-time fluorescence quantitative PCR. On this basis,the correlations of UCA1 to clinicopathological characteristics and prognosis of glioma were assessed.Result:LncRNA UCA1 expression in the glioma samples was obviously higher as compared with the normal brain samples(P＜0.001),and the expression was significantly correlated to grading of the tumors(P＜0.05).However,lncRNA UCA1 expression was not correlated to age,gender,tumor size and KPS score(P＞0.05).Conclusion:UCA1may serve as an independent prognostic indicator and a novel therapeutic target for glioma.
[Key words] glioma;long non-coding RNA;urothelial carcinoma antigen 1;prognosis
[中图分类号] R651.1+9
[文献标志码]A
［文章编号］1006-2440（2016）06-0574-03
[收稿日期] 2016-10-18
*[作者简介] 蔡正华，男，汉族，江苏通州人，生于1969年7月，硕士，副主任医师。研究方向：脑外伤抢救治疗及脑肿瘤诊治。
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