葛 平1，刘学杰1，王 峰2，陈 蓉1，徐 蓉1，王敬华1
（1.上海市临床检验中心，上海 200126；2.上海市脐带血造血干细胞库，上海 200051）
摘要：目的对不同分娩方式采集的脐带血污染的细菌谱及污染菌的来源进行分析，为提高脐带血采集质量提供数据参考。方法收集2012年8月至2014年7月上海市脐带血造血干细胞库保存的脐带血11 435例，分离出细菌511株，对511株细菌进行鉴定并分析其可能的来源。结果在不同分娩方式采集的脐带血中，顺产和剖腹产的单纯厌氧菌污染率分别为65.2％（274例）和64.9％（48例），需氧菌污染率分别为34.8％（146例）和35.1％（26例）；使用产钳分娩采集的脐带血厌氧菌和需氧菌的污染率分别为56.3％（9例）和43.8％（7例）。脐带血污染的厌氧菌主要为拟杆菌属和真杆菌属细菌，占厌氧菌总数的69.3％；需氧菌污染主要是肠杆菌科和葡萄球菌属细菌，占74.3％。结论不同分娩方式采集的脐带血被污染最多的菌株是厌氧菌，但污染率没有明显差异。污染脐带血的大部分厌氧菌（以拟杆菌属和真杆菌属细菌为主）和需氧菌（以肠杆菌科和葡萄球菌属细菌为主）是产妇生殖道的定植菌，是脐带血被污染的主要来源，在采集脐带血的过程中严格执行无菌操作将会提高脐带血的质量。
关键词：脐带血；污染；厌氧菌；需氧菌
脐带血是胎儿娩出、脐带结扎并离断后残留在胎盘和脐带中的血液，通常是废弃不用的。20世纪70年代，MORTENSEN等[1]发现脐带血中含有丰富的造血干细胞，可用于重建人体造血和免疫系统，治疗多种疾病。脐带血作为造血干细胞特别是无血缘关系造血干细胞的来源，是一种非常重要的人类生物资源，对其的保存质量关系到未来使用的安全性。本研究分析了近3年11 435例脐带血无菌试验中检出的511株细菌及其污染来源，探索控制脐带血污染的途径，以有效提高脐带血的采集成功率。
材料和方法
一、样本来源
收集上海市脐带血造血干细胞库2012年8月至2014年7月保存的来自11 435份脐带血分离的菌株511株，被污染的脐带血均被单一细菌污染。
二、细菌鉴定分析
脐带血样本保存前的无菌试验按《全国临床检验操作规程》（第3版）[2]的临床血流感染检验规范要求操作。将脐带血分别注入树脂需氧瓶、厌氧瓶、真菌瓶，放Bact 9120全自动血培养仪培养（美国BD公司）。培养瓶阳性报警后作直接涂片和革兰染色镜检，随后按需氧瓶、厌氧瓶、真菌瓶培养阳性的结果分别作相应的分离培养，分离的菌株采用VITEK 2 Compact全自动细菌分析仪（法国生物梅里埃公司）或MicroScan WalkAway-96 Plus（德国西门子公司）作细菌鉴定。
三、统计学方法
采用SPSS 17.0软件进行χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
一、脐带血细菌污染率
2012年8月至2014年7月，从11 435份脐带血中分离出菌株511株，总污染率为4.47％，其中2012年9至12月污染率为4.6％（83/1 806），2013年1至12月污染率为4.4％（261/5 956），2014年1至8月污染率为4.5％（167/3 637），3年的污染率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。
二、病原菌分布
在分离出的511株细菌中需氧菌179株（占35.0％），其中肠杆菌科和葡萄球菌属细菌共133株（74.3％）；厌氧菌332株（占65.0％），其中拟杆菌属和真杆菌属细菌共230株（69.3％）。不同分娩方式污染的需氧菌比例基本一致（水中分娩因样本数较少不作比较），见表1。在顺产分娩的脐带血被污染的菌株中，居需氧菌和厌氧菌第1位的分别是肠杆菌科细菌（90株，占61.6％）和拟杆菌属细菌（134株，占48.9％），见表2。在剖腹产分娩的脐带血被污染的菌株中，居需氧菌和厌氧菌第1位的分别是葡萄球菌属细菌（11株，占42.7％）和真杆菌属细菌（19株，占39.6％），见表3。在使用产钳和水中分娩的脐带血被污染的菌株中，居需氧菌和厌氧菌第1位的分别是肠杆菌属细菌（5株，占71.4％）和拟杆菌属细菌（5株，占50.0％），见表4。
表1 511株不同分娩方式的脐带血污染菌的分布情况[例（％）]
分娩方式需氧菌厌氧菌合计顺产146（34.8）274（65.2）420（82.2）剖腹产26（35.1）48（64.9）74（14.5）产钳7（43.8）9（56.3）16（3.1）水中分娩0（0.0）1（100.0）1（0.2）
表2 顺产分娩脐带血污染的146株需氧菌和274株厌氧菌的分布情况
（％）厌氧菌株数构成比（％）肠杆菌科9061.6拟杆菌属13448.9葡萄球菌属2013.7真杆菌属 5419.7肠球菌属1510.3消化链球菌属 217.7链球菌属106.9乳杆菌属 176.2其他孪生球菌、微球菌等需氧菌株数构成比117.5放线菌属 176.2梭状芽胞杆菌属103.6丙酸杆菌 72.6双歧杆菌属 72.6其他丙酸杆菌属等72.6
表3 剖腹产分娩脐带血污染的26株需氧菌和48株厌氧菌的分布情况
构成比（％）葡萄球菌属1142.7真杆菌属1939.6肠杆菌科726.9拟杆菌属1633.3肠球菌属623.1丙酸杆菌属816.7链球菌属27.7乳杆菌属36.3其他厌氧菌24.2需氧菌株数构成比（％）厌氧菌株数
表4 其他方式分娩（使用产钳和水中分娩）脐带血污染的7株需氧菌和10株厌氧菌的分布情况
构成比（％）肠杆菌科571.4拟杆菌属550.0产单核细胞李需氧菌株数构成比（％）厌氧菌株数斯特菌114.3真杆菌属220.0痤疮丙酸杆菌110.0二氧化碳嗜纤维菌属114.3麦氏放线菌110.0普氏厌氧球菌110.0
脐带血中含有非常丰富的造血干细胞，可用于重建人体造血和免疫系统，治疗血液系统、免疫系统、遗传代谢性及先天性疾病，是一种非常重要的人类生物资源[3-5]。
本研究3年间11 435例脐带血中共有511例因被污染而不适宜保存和使用，其总污染率为4.47％，略高于朱美玲等[6]3.3％和李金全等[7]3.1％的报道，低于罗伟琼等[8]7.1％的报道。按不同分娩方式分类，顺产的脐带血污染的需氧菌和厌氧菌分别是146株和274株；剖腹产的脐带血污染的需氧菌和厌氧菌分别是26株和48株；使用产钳分娩的脐带血污染的需氧菌和厌氧菌分别是7株和9株；水中分娩的脐带血污染厌氧菌1株。从上述脐带血的污染细菌的统计分析看，不同的分娩方式其脐带血污染的细菌谱没有明显差异，均以厌氧菌污染为主，尤其是拟杆菌属和真杆菌属细菌的污染（占厌氧菌的69.3％）。在被污染的脐带血中，肠杆菌科、葡萄球菌属、拟杆菌属和真杆菌属是主要污染菌，这四大类细菌为人体口腔、呼吸道、肠道、生殖道的正常菌群。
综上所述，不同分娩方式产妇其脐带血细菌污染率基本相同，污染的细菌来源主要是生殖道、体表皮肤及人体其他部位定值菌，因此产妇在分娩后，其脐带血在被采集时往往会被这些外生殖道或体表皮肤存在的多种细菌污染，所以加强脐带血采集时的消毒以及规范的操作将是脐带血合格的保证，同时也将有助于更好、更多地保存人类的生物资源。
参考文献：
[1]MORTENSEN BT，KNUDTZON S，HOVGAARD D，et al. Bone marrow culture and haemopoietic growth factors：recent developments and current status[J]. Eur J Haematol Suppl，1988，48：77-84.
[2]叶应妩，王毓三，申子瑜. 全国临床检验操作规程[M]. 3版. 南京：东南大学出版社，2006：738-740.
[3]ALKINDI S，DENNISON D. Umbilical cord blood banking and transplantation[J]. Stem Cell Biology and Regenerative Medicine，2014，35（3）：324-329.
[4]蔡志扬，钱宝华，郭峰，等. 脐带血细胞天然免疫功能测定及研究[J]. 深圳中西医结合杂志，2005，15（1）：39-41.
[5]黄志行，田春芳. 脐带血的研究现状及其临床应用进展[J]. 医学综述，2015，22（8）：1375-1376.
[6]朱美玲，陈汝光，奚永志，等. 脐血采集和分离过程中病原微生物污染概率的研究[J]. 中国实验血液学杂志，2002，10（4）：355-358.
[7]李金全，韩峻领，李新. 脐带血采集中微生物污染原因分析[J]. 口岸卫生控制，2009，14（1）：21-22.
[8]罗伟琼，李沈容，罗小珍，等. 脐血采分过程中微生物污染的探讨[J]. 中国卫生检验杂志，2006，16（12）：1517.
Contamination bacteria in cord blood among pregnant women with different delivery modes
GE Ping1，LIU Xuejie1，WANG Feng2，CHEN Rong1，XU Rong1，WANG Jinghua1. （1. Shanghai Center for Clinical Laboratory，Shanghai 200126，China；2. Shanghai Cord Blood Bank，Shanghai 200051，China）
Abstract：ObjectiveTo analyze contamination bacterium spectra in cord blood among pregnant women with different delivery modes and the sources of contamination when collecting，in order to improve the collection quality for cord blood.MethodsA total of 11 435 specimens of cord blood from Shanghai Cord Blood Bank were collected from August 2012 to July 2014. A total of 511 isolates and their sources were identified.ResultsThe contamination rates of anaerobic bacteria by spontaneous deliver and cesarean were 65.2％（274 cases） and 64.9％（48 cases），and their contamination rates of aerobic bacteria were 34.8％（146 cases） and 35.1％（26 cases）. The contamination rates of anaerobic bacteria by forceps delivery were 56.3％（9 cases） and 43.8％（7 cases）. The main anaerobic bacteria were Bacteroides and Eubacterium，accounting for 69.3％. The main aerobic bacteria were Enterobacterium and Staphylococcus，accounting for 74.3％.ConclusionsAnaerobic bacteria are main contamination bacteria in cord blood，and its contamination rate has no difference by different delivery modes. Colonization bacteria from genital tract are anaerobic bacteria（Bacteroides and Eubacterium） and aerobic bacteria（Enterobacterium and Staphylococcus），which are the main contamination sources for cord blood. It should strengthen aseptic processing when collecting cord blood in order to improve its quality.
Key words：Cord blood；Contamination；Anaerobic bacteria；Aerobic bacteria
文章编号：1673-8640（2016）12-1066-03
中图分类号：R446.1
文献标志码：A
DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2016.12.012
（收稿日期：2016-05-18）
（本文编辑：姜 敏）
作者简介：葛 平，男，1960年生，副主任技师，主要从事临床微生物检验与质量控制工作。
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