徐安平， 纪 玲， 陈卫东， 夏 勇， 喻 晶， 周 宇 ， 李 璐
（北京大学深圳医院检验科，广东 深圳 518036）
摘要：目的 探讨血红蛋白H（HbH）病对4种糖化血红蛋白（HbA1c）检测系统的影响，以及HbA1c检测系统是否适用于HbH病患者。方法 收集HbH病样本27例，对照组样本30例。采用亲和层析高压液相色谱法、毛细管电泳法、免疫透射比浊法和离子交换高压液相色谱法进行HbA1c检测，以亲和层析高压液相色谱法为参比系统，比较不同检测系统HbA1c结果的差异。同时检测空腹血糖（FG）和糖化血清蛋白（GSP），比较对照组和HbH样本的FG、GSP、HbA1c和平均血糖的结果差异。结果 3种检测系统与参比系统（Ultra2）的HbA1c结果比较，P值分别为0.08、0.89和0.64，差异均无统计学意义（P＞0.05）；对照组和HbH样本的FG和GSP结果差异无统计学意义（P＞0.05），对照组和HbH样本的HbA1c和平均血糖结果差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 HbH病患者的HbA1c结果不能代表平均血糖水平，HbA1c指标不适用于此类患者的长期血糖水平监控。
关键词：糖化血红蛋白；血红蛋白H；红细胞生命周期；平均血糖
糖化血红蛋白（glycated hemoglobin A1c，HbA1c）在糖尿病中的应用越来越受到关注，但其检测方法和影响因素很多［1］。HbA1c结果主要取决于血糖水平和红细胞生命周期，所以任何影响红细胞生命周期的因素都可能影响HbA1c结果。HbH病是一种由于血红蛋白（hemoglobin，Hb）α基因缺失导致Hb合成异常的中型地中海贫血，表现为溶血性贫血，其红细胞生命周期缩短。本研究主要探讨HbH病对HbA1c检测的影响，从而推断HbA1c检测系统是否适用于HbH病患者。
一、对象
收集2014年1至12月北京大学深圳医院确诊的HbH病样本27例，其中男7例，女20例，年龄13～58岁。同时以HbH病样本的空腹血糖（fasting glucose，FG）水平为参照，收集样本30例作为对照组，对照组样本排除缺铁性贫血、Hb病等引起贫血的疾病，排除HbH病合并Hb Bart's而影响毛细管电泳法检测HbA1c的样本。
二、样本采集
1. 采用乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）二钾抗凝的真空采血管，采血后立即轻轻颠倒5～8次充分混匀，每个样本分装-80 ℃冷冻保存，用于HbA1c检测。
2. 采用分离胶真空干燥管，采血后2 012×g离心10 min分离血清，用于FG和糖化血清蛋白（glycated serum protein，GSP）检测。
三、方法
1. HbH基因确诊 深圳益生堂生物企业有限公司的地中海贫血基因检测试剂盒用于检测α、β地中海贫血。
2. HbA1c和GSP检测 采用亲和层析高压液相色谱法［仪器采用Ultra2（美国Primus公司）］、毛细管电泳法［仪器采用Capillary 2 Flex Piercing（法国Sebia，CFP）］、免疫透射比浊法［试剂采用one HbA1cFS（德国德赛，oFS）］和离子交换高压液相色谱法［仪器采用Variant II Turbo 2.0（美国伯乐，VII-T 2.0）］进行HbA1c检测，同时在BECKMAN AU5400生化仪上检测所有样本的FG 和GSP。所有检测系统均使用原装配套试剂、校准品和质控品。室内质控均符合质控规则要求。27例HbH样本的Hb浓度范围为67～112 g/L，按照厂家声明，此浓度范围的Hb不影响HbA1c检测。
四、统计学方法
采用SPSS 19.0软件统计。检测结果均以
一、HbH样本基因型及表型特征
毛细管Hb电泳显示有HbH带，基因型为--SEA/-α3.723例，--SEA/-α4.24例。对照组和HbH 样本的红细胞（red blood cell，RBC）数量、Hb、平均红细胞体积（mean corpuscular volume，MCV）、平均Hb含量（mean corpuscular hemoglobin，MCH）和HbA2水平见表1。
表1 对照组和HbH样本表型特征
组别 例数 RBC（×1012/L） Hb（g/L） MCV（fL） MCH（Pg） HbA2（%）对照组 30 95%CI 4.51～4.90 138.5～151.1 88.0～90.4 29.8～30.7 2.7～2.9均值 4.70±0.53 144.8±16.8 89.2±3.3 30.2±1.19 2.8±0.3 HbH 27 95%CI 4.67～5.43 87.0～100.0 62.4～67.5 18.2～19.1 0.9～1.2均值 5.05±0.75 93.7±13.1 65.0±4.9 18.6±0.9 1.1±0.2 P值 0.07 0.00 0.00 0.00 0.00
二、HbH样本的HbA1c图谱
4种HbA1c检测系统中，CFP和VII-T 2.0在给出HbA1c的结果时均能提示HbH带［图1（a）、图1（b）］，Ultra2检测总HbA1c［图1（c）］和免疫法只能给出HbA1c数值，不提示存在HbH带。
三、4种检测系统之间结果差异性比较
CFP、oFS、Ultra2和VII-T 2.0的HbA1c结果均值分别为4.1% ± 0.3%、3.9% ± 0.4%、3.8% ± 0.6%和3.7% ± 0.5%。以Ultra2为参比系统，CFP、oFS和VII-T 2.0与Ultra2的HbA1c结果比较，P值分别为0.08、0.89和0.64 （P＞0.05），差异无统计学意义。4种检测系统HbA1c结果分布见图2，图中虚线代表HbA1c4%～6%参考区间。
图1 HbH样本的HbA1c图谱
注：（a）CFP；（b）VII-T 2.0；（c）Ultra2
图2 HbH样本的HbA1c结果分布图
四、对照组和HbH样本的结果比较
对照组和HbH样本的FG和GSP的P值分别为0.64和0.07（P＞0.05），差异无统计学意义。对照组和HbH样本的HbA1c和平均血糖（estimated average glucose，eAG）差异均有统计学意义（P=0.00）（表2）。HbH样本的HbA1c为4种检测系统的均值，对照组HbA1c为Ultra2结果，eAG是根据HbA1c结果均值通过美国国家糖化血红蛋白标准计划网站在线计算得出。
表2 对照组和HbH样本的HbA1c与GSP结果比较
eAG （mmol/L）对照组 30 4.86±0.64 208.3±15.8 4.9±0.5 5.2 HbH 27 4.93±0.57 217.1±17.4 3.8±0.6 3.2 P值 0.64 0.07 0.00 0.00组别例数 FG （mmol/L）GSP （μmol/L）HbA1c（%）
HbA1c是人体血液中葡萄糖与Hb链上的游离氨基酸之间非酶促作用的产物。HbA1c是糖尿病患者长期血糖水平监控的金标准，2009年国际专家委员会推荐HbA1c为糖尿病诊断标准［2］。HbA1c水平取决于血糖浓度和RBC生命周期。因此，凡影响RBC寿命和Hb结构的病例均影响HbA1c的检测，进而影响临床治疗效果的评估和患者的病情控制。HbA1c与RBC生命周期呈函数关系，RBC生命周期改变会导致HbA1c结果较大改变［3-4］。
研究表明，HbA1c受到Hb变异体和地中海贫血的影响［5-7］，影响主要表现在2个方面：其一是对基于不同原理和方法的不同HbA1c检测系统产生影响，主要是Hb变异体的影响，此时HbA1c结果不准确；其二是Hb病引起RBC生命周期的改变，此时HbA1c结果准确，但是HbA1c不能够代表正常RBC生命周期内的eAG水平，此时，HbA1c不适用于糖尿病患者的诊断和血糖水平长期的监控。
据统计，地中海贫血在中国广东地区，α、β和α合并β地中海贫血流行率分别为12.03%、3.80%和0.63%，其中HbH病占α地中海贫血的1.7%［8］。HbH病表现为小细胞低色素贫血，RBC生命周期缩短。HbA1c图谱（图1）显示，VII-T 2.0和毛细管电泳能够分离提示HbH病，Ultra2和免疫法则不能提示存在HbH病。以Ultra2为参比系统，CFP、oFS和VII-T 2.0与Ultra2的HbA1c结果的差异无统计学意义（P＞0.05），且按照厂家声明已排除贫血对检测系统的影响，说明HbH病对于这4种HbA1c检测系统无显著影响，4种检测系统给出的结果是基本准确的。既往有研究表明轻型β地中海贫血对HbA1c检测系统无显著影响［9］。HbH病是由于Hb α基因缺失导致Hb合成异常的中型地中海贫血，其对HbA1c的影响尚未见报道。
本研究结果显示，4种HbA1c检测系统给出的HbH样本的HbA1c结果均值均偏低，接近或者低于HbA1c参考区间的下限，而HbH样本的FG水平均为正常，与对照组相比，FG结果之间差异无统计学意义（P＞0.05），而HbA1c结果差异具有统计学意义（P＜0.01），eAG的结果表明对照组和HbH样本的HbA1c结果代表了不同的eAG水平，说明HbH引起的RBC生命周期缩短，血糖与Hb之间的非酶促化学反应还未能达到平衡时RBC便死亡，导致HbA1c结果低于正常水平。此时，糖尿病容易漏诊。对照组与HbH样本组的GSP结果之间差异无统计学意义（P＞0.05），说明在RBC生命周期改变时，GSP等指标可以用于短期血糖水平监控。
综上所述，HbH对于不同的HbA1c检测系统无显著影响，但是对于RBC生命周期会产生较大影响，因而其HbA1c结果已经不能代表正常RBC生命周期的eAG水平。从另一个侧面来讲，理想的HbA1c检测系统应该能够提示Hb病，因为此时HbA1c结果尽管是准确的，但是可能已经不适用于Hb病合并糖尿病的诊断和长期血糖水平的监控。
参考文献
［1］ 闫颖，张传宝，张江涛，等. 三种相同原理的糖化血红蛋白分析仪检测结果的初步比对［J］. 检验医学， 2012， 27（7）：575-578.
［2］International Expert Committee. International Expert Committee report on the role of the A1C assay in the diagnosis of diabetes［J］. Diabetes Care，2009，32 （7）： 1327-1334.
［3］RHEA JM，ROBERTS-WILSON TK，MOLINARO RJ. Impact of hemoglobin variants on HbA1c interpretation：do we assume too much？ ［J］. MLO Med Lab Obs，2012，44（6）：8.
［4］COHEN RM，FRANCO RS，KHERA PK，et al. Red cell life span heterogeneity in hematologically normal people is sufficient to alter HbA1c［J］. Blood，2008，112（10）：4284-4291.
［5］LIN CN，EMERY TJ，LITTLE RR，et al. Effects of hemoglobin C，D，E，and S traits on measurements of HbA1c by six methods［J］. Clin Chim Acta，2012，413（7-8）：819-821.
［6］LITTLE RR，ROHLFING CL，HANSON S，et al. Effects of hemoglobin （Hb）E and HbD traits on measurements of glycated Hb（HbA1c）by 23 methods［J］. Clin Chem，2008，54（8）：1277-1282.
［7］JI L，YU L，ZHOU Y，et al. Erroneous HbA1c measurements in the presence of β-thalassemia and common Chinese hemoglobin variants［J］. Clin Chem Lab Med，2015，53（9）：1451-1458.
［8］LI B，ZHANG XZ，YIN AH，et al. High prevalence of thalassemia in migrant populations in Guangdong Province，China［J］. BMC Public Health，2014，14：905.
［9］POLAGE C，LITTLE RR，ROHLFING CL，et al. Effects of beta thalassemia minor on results of six glycated hemoglobin methods ［J］. Clin Chim Acta，2004，350（1-2）：123-128.
The applicability of glycated hemoglobin A1cfor patients with hemoglobin H disease
XU Anping，JI Ling，CHEN Weidong，XIA Yong，YU Jing，ZHOU Yu，LI Lu.
（Department of Clinical Laboratory，Shenzhen Hospital，Peking University，Shenzhen 518036，Guangdong，China）
Abstract：Objective To investigate the influence of hemoglobin H （HbH） disease on 4 kinds of glycated hemoglobin A1c（HbA1c） systems and the applicability of HbA1cfor patients with HbH disease. Methods A total of 27 samples with HbH disease and 30 control samples were collected. HbA1cdeterminations were performed by boronate affinity high performance liquid chromatography，capillary electrophoresis，turbidimetric immunoassay and ion exchange high performance liquid chromatography. The difference of the 4 systems was compared. Fasting glucose（FG） and glycated serum protein（GSP） were determined as well. The differences of FG，GSP，HbA1cand average glucose were compared between control and HbH disease groups. Results Compared with boronate affinity high performance liquid chromatography（Ultra2），P values were 0.08，0.89 and 0.64，with no statistical significance（P＞0.05）. The differences of FG and GSP had no statistical significance between control and HbH disease groups（P＞0.05）. The differences of HbA1cand average glucose had statistical significance between control and HbH disease groups（P＜0.01）. Conclusions HbA1cof HbH disease group can not reflect the real level of average glucose，and it is not applicable for long-term blood glucose monitoring in patients with HbH disease.
Key words：Glycated hemoglobin A1c；Hemoglobin H；Red blood cell life span；Average glucose
（收稿日期：2015-07-23）
（本文编辑：范基农）
基金项目：深圳市科技计划创新项目（JCYJ20140415162338838）
作者简介：徐安平，男，1978年生，硕士，副主任技师，主要从事生物化学检验工作。
通讯作者：纪 玲，联系电话：0755-83923333-2299。
联系客服
