《Anticancer Research》在2009年刊登一篇名为“Determinants of Homocysteine Levels in Colorectal and Breast Cancer Patients”的研究性论文，研究了结肠直肠癌和乳腺癌患者中同型半胱氨酸水平的决定因素。
本研究是首次针对癌症患者的TNF-α和血浆tHcy水平相关性开展的研究。共有47例患者（平均年龄59±14岁，其中男性15例）最为病例组，其中乳腺癌18例，结直肠癌29例。受试者中，35人为原发性癌症，其余12人为复发性癌症。所有患者均在“Tor Vergata”临床中心肿瘤内科进行随访。同期招募47例健康受试者(平均年龄43±12岁)作为对照组，其中含男性15例。分析了47名癌症患者的Hcy水平与亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)多态性、叶酸和炎症标志物的相关性。
实验结果：
（一）乳腺癌和结直肠癌与MTHFR多态性及基因型分布的相关性
在分子水平研究的基础上，将癌症组和对照组中所有研究对象的MTHFR基因分为三种基因型: C677T突变分为CC型、CT型和TT型, A1298C突变分为AA型、AC型和CC型。
癌症组和对照组的MTHFR C677T基因型分布(癌症组分别为36%、41%和23%；对照组分别为38%、53%和9%)与Hardy-Weinberg分布无显著差异(HW probability test=1.491，对照组为1.317)。
癌症组和对照组的MTHFR A1298C基因型分布(癌症组分别为(51%、43%和6%；对照组分别为66%、30%和4%)与Hardy-Weinberg分布无显著差异(HW probability test =0.189，对照组为0.068)。
MTHFR基因型在癌症患者和健康受试者中的频率分布如Figure 1所示。乳腺癌和结直肠癌患者C677T和A1298C等位基因频率无显著差异，且等位基因频率与肿瘤患者临床病理参数无相关性(数据未给出)。
（二）乳腺癌和结直肠癌的tHcy水平与临床病理参数的相关性
癌症患者的血浆tHcy水平较高(Mann Whitney test for mid (IQR): 8.0 μM(6.0-10.0),与对照组(6.4μM(5.8-8.8)相比，p = 0.04))(Table I)。以对照组观测值的平均值+2SD为基础，将tHcy水平分为低水平(≤11.5μM)组和高水平组(＞11.5μM)。然后分析tHcy水平与临床病理参数的相关性。如Table II所示，血浆tHcy水平升高仅与癌症转移性疾病的发生相关(卡方分析:p<0.01)，除此之外，tHcy水平与肿瘤患者的部位、分期、肿瘤大小、癌症患者的淋巴结转移均无显著相关性。
（三）乳腺癌和结直肠癌患者的tHcy水平、叶酸水平和MTHFR多态性的相关性
ANOVA检验表明,血浆tHcy水平与MTHFR 677 C→T(F = 0.216,p = 0.81)和1298→C(F = 0.243,p = 0.79)无相关性,但与癌症患者的叶酸水平呈现负相关(Spearman rank correlation: Rho=0.567, p<0.0001) (Figure 2).
进一步分析不同MTHFR C677T基因型患者的血浆tHcy水平的分布以及不同叶酸水平(根据所有被招募对象叶酸水平的上四分位数（即12 ng/ml）分为高水平组和低水平组)表明,TT基因型患者的血浆tHcy水平最高，叶酸水平较低(F = 3.34,p = 0.045)(Figure 3)。
（四）维生素B12和炎症与乳腺癌和结直肠癌的相关性
通过测定维生素B12, hs-CRP、纤维蛋白原、 IL-6和TNF-α水平进一步分析癌症患者的营养和炎症状态。结果总结在Table IV。不出所料,癌症患者血清hs-CRP (p = 0.004) IL - 6 (p = 0.001)和TNF-α(p = 0.04)水平高于对照组,而维生素B12和纤维蛋白原水平与对照组相似。乳腺癌患者与结直肠癌患者无明显差异。
（五）乳腺癌和结直肠癌患者的叶酸水平、炎症与tHcy水平的相关性
斯皮尔曼等级测试进行单因素相关性分析表明,乳腺癌和大肠癌患者的血浆tHcy水平均与IL - 6(ρ= 0.483,p = 0.001)和TNF-α(ρ= 0.298,p = 0.042)显著相关。(Figure 4)。
为了进一步评估癌症患者临床和实验室特征中tHcy水平的可能决定因素，该研究将tHcy作为因变量，同时将性别,诊断、肿瘤阶段,维生素B12、叶酸、纤维蛋白原,hs-CRP, IL-6, TNF-α和MTHFR C677T多态性等位基因频率作为预测变量，进行了多元线性回归分析。结果显示,只有TNF-α(β= 0.45,p = 0.014)和叶酸水平(β= -0.44,p = -0.44)是tHcy水平升高的独立预测因子(Table III)。TNF-α与IL-6水平升高显著相关(β= 0.52,p = 0.003)(Table III)。
实验讨论与结论：
该研究表明,乳腺癌或直肠癌的发生与其MTHFR等位基因或基因型无关。这些结果证实了一些研究的结论，即MTHFR的TT基因型与癌症风险增加之间缺乏相关性，但也有其他研究结果显示MTHFR 677T/T基因型与防御癌症相关。事实上,关于MTHFR C677T变异在癌症患者中的作用存在争议，有些研究者持相反观点或是认为存在其他潜在的因素 (Table IV)。
增加与野生型基因型相关的肿瘤风险的原因，一方面可能是DNA甲基化异常，即低甲基化引起染色体不稳定或区域特异性高甲基化导致肿瘤抑制基因失活。另一方面，突变基因型与癌症风险增加的相关性与Hcy的增加有关。
研究肿瘤患者血浆同型半胱氨酸水平的分布与MTHFR基因型的相关性，结果表明，与对照组相比，肿瘤患者组的tHcy水平明显升高。此外,关于人群基因型与癌症之间相关性的研究证实，MTHFR基因677位点的T突变是血浆tHcy水平的主要决定因素,但仅限于叶酸水平较低的患者,这与之前发表的在其他亚组患者中进行的研究一致。
除了可以破坏DNA甲基化，高同型半胱氨酸血症还可以通过氧化应激促进炎症过程。因此，同型半胱氨酸诱导的与细胞粘附分子、细胞因子和趋化因子相关的损伤可能引发癌症。炎症状态往往伴随着促炎细胞因子(IL-6和TNF-α)和hs-CRP的升高。本研究显示，受试人群出现了上述的炎症状态，并且这种状态与tHcy水平的升高密切相关。实际上,针对癌症患者的多元分析表明,TNF-α水平与叶酸水平是tHcy升高的独立预测因子。众所周知,肿瘤细胞和/或肿瘤相关白细胞会产生炎性细胞IL-6和TNF-α等。这些细胞因子的循环水平已经与癌症患者的疾病状态相关，并且IL-6已被证实可能是结肠直肠癌存活率的一个独立的负性预后指标。考虑到多种病理生理变化与癌症有关,而且统计相关性并不一定表明生物学关系,因此，不能认为TNF-α和tHcy在癌症发生发展过程中具有病理生理意义。尽管如此,本研究发现MTHFR多态性对乳腺癌和结直肠癌tHcy水平无显著影响，但TNF-α与乳腺癌或结直肠癌患者的血浆总高半胱氨酸水平相关，这表明癌症相关的炎症可能与tHcy水平升高有关,可能涉及TNF-α介导的通路。
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