高效液相色谱主要包括：流动相模块，在线脱气模块，动力模块（泵），进样模块，柱温箱模块，检测器模块等。以下我们将详细讨论其中流动相模块、动力模块、自动进样器模块、柱温箱模块的使用注意事项，而这些模块往往也是影响检测结果的重要模块。流动相就如同人体的血液，其质量直接影响到整个系统的正常运行与否。在日常使用中避免使用可腐蚀钢的溶剂，如：碱金属卤化物及其酸溶液(如：碘化锂、氯化钾等)；高浓度无机酸，如硝酸、硫酸；流动相可以使用超纯水、磷酸、磷酸二氢钾、三乙胺、离子对试剂、正己烷、正庚烷、甲醇、乙醇、乙腈、甲酸、甲酸铵、乙酸、乙酸铵、丙酮、异丙醇、氨水等。每瓶流动相中配有过滤器，应定期检查溶剂过滤器是否变色，定期清洗溶剂过滤器及溶剂瓶，每三个月至少清洗一次。应该使用HPLC级的溶剂，不能互相混溶的溶剂不可以直接切换。一般在水相和与其不能混溶的溶剂切换时，使用异丙醇作为过渡溶剂。HPLC所使用的水必须是新鲜的和经过0.45μm滤膜过滤过的(RRLC则必须使用0.2μm滤膜过滤)。长期不用时，必须把使用水的管路用有机溶剂置换，防止长霉。仪器使用完后要采用适当的溶剂冲洗等方法维护色谱柱和系统。如果使用了缓冲盐一定先将盐要冲洗干净。仪器长期不用时，要使用有机相封存。四元低压系统属于泵前混合，由于在常压下混合，极易产生气泡，必须配有在线脱气机，并要求流动相使用前进行脱气，流动相脱气得目的如下：使色谱泵输液均匀准确，减小脉动；提高保留时间和色谱峰面积的重现性；防止气泡引起尖峰；使基线稳定，提高信噪比；降低溶剂的紫外吸收本底；减少死体积； 防止填料氧化。
输液泵：将流动相在高压下连续不断地送入液路系统，具有有足够的压力，输出流量恒定、可调，输出压力平稳，泵室体积小，泵体抗腐蚀、耐酸等特点。压力平稳、流速恒定是HPLC系统稳定、重现性良好的前提条件，多数的HPLC故障、色谱数据异常均会表现出压力异常，如偏高、偏低、波动大等，在日常使用中需要特别关注压力变化。操作泵之前，至少脱气5分钟。使用缓冲溶液时，关泵前要先用水冲洗系统。当需要长时间使用0.1摩尔或更高浓度的缓冲液时，最好选用密封垫清洗附件以减少对密封垫及活塞杆的磨损。用水定期冲洗除去可能在阀口析出的盐结晶。如果使用了高浓度的缓冲盐，可以用热水（50－60℃）来冲洗盐通道来确保没有缓冲盐残留在系统中。自动进样系统，主要由定量环、六通阀、进样针等部件组成。手动进样系统的定量环用于准确定量，分为5μl、10μl、20μl等，需要根据不同进样量选择合适的定量环；自动进样系统仪器自带定量环多为100μl，如进样量大于定量环体积需咨询相应仪器工程师更换定量环及计量泵等，六通阀是最理想的进样部件，由圆形密封垫（转子）和固定底座（定子）组成，通过阀切换保证恒定的流速，下图为六通阀不同状态流路示意图。
当使用专用清洗液瓶时，应在每次开机前将瓶中的溶剂换成脱气的溶剂，并注意检查量是否充足。样品瓶、多孔板及样品托盘重新放置后，应对其放置是否正确进行确认，以免造成进样针的损坏。在使用非标准样品容器或衬管时，应注意测量瓶底的高度和宽度并对进样针插入高度进行相应的修改。
使用液相色谱进行分析时，柱温箱对实验分析的稳定性高、灵敏度、重现性作出了重要的贡献。柱温箱主要作用在于使柱子的温度保持一定，按照温度调节方式大致分为：空气循环式、水夹套式以及模块加热式。液相色谱法支配分离的的方式有：分配、吸附、离子交换、尺寸排除，这些平衡依赖于温度，通过柱温箱维持柱温，似的在试样的分离，选择性以及保留时间上得到良好的重现性。另外由于温度越高，目标成分与固定相的平衡变快，柱效将增长，分离也会有所改善。另外柱温箱有助于稳定电信号，减少信号波动，也有利于降低液体的粘度从而降低柱压。
连接的管路要尽量短，防止热扩散及峰增宽。除非特殊应用，建议将两边温度设置一样。在使用冷却功能时，要防止因冷凝水而触发漏液传感器。换柱的时候，注意螺丝一定要注意，可以用手旋紧后，再用扳手旋紧，在实验过程中要关好前盖。 1 紫外-可见光（UV-VIS）检测器
波长范围190～800mm，190～400mm为紫外区域，氘灯，400～800mm为可见光区域，钨灯。其特点为灵敏度高，最小检测浓度10-9g/ml，线性范围宽，对温度和流速不敏感，可进行梯度洗脱，应用范围广。适用于带有共轭基团的化合物，为最常用的检测器。 2 二极管阵列检测器（diode-arraydetector , DAD）
普通UV-VIS检测器是先用单色器分光，只让特定波长的光进入流动池。而二极管阵列UV-VIS检测器是先让所有波长的光都通过流动池，然后通过一系列分光技术，使所有波长的光在接受器上被检出。 1 泵的维护保养：
防止任何固体微粒进入泵体，否则会磨损柱塞、密封环缸体和单向阀，因此应预先对流动相进行过滤，可采用Millipore滤膜(0．22μm或 0．45μm )等过滤。泵的入口都应该连接砂滤棒(或片)， 输液泵的滤器应经常更换。流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，尤其是停泵过夜或更长时间。分析工作结束后必须用纯水充分清洗后，再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂(对于反相键合固定相，可以是甲醇或甲醇和水)泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、密封环或缸体，最终产生漏液。输液泵的工作压力不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。 2 紫外检测器维护保养：
流通池进入气泡会干扰基线，并极难排出，应使用充分脱气的流动相，以减少气泡的产生。应定期冲洗系统，避免流通池干涸。检测器中氘灯( 光源) 随着使用时间的增加，氘灯强度降低，噪音会不断增大，分析工作结束及时关闭检测器（频繁开关检测器也会缩短检测器寿命，一般开启间隔少于4小时，不建议关闭检测器）。 尘埃在静电的作用下容易覆盖在光学元件上，使光传播效率降低，增加了光散射， 影响分析效果， 因此检测器周围的环境应保持清洁。
上海凌凯医药科技有限公司(Linkchem)成立于2007年5月，总部设在上海。公司秉承“Link the world,we are the world!”的企业文化，是一家按照国际标准为全球化学和生物制药公司以及科研单位提供医药定制开发、生产服务的高新技术企业。公司依托上海的研发中心，与国内外知名企业、科研院校建立了长期战略合作伙伴关系。在江苏拥有GMP原料药以及中间体合作生产基地，公司为了扩大品种生产线，2018年先后在山东、江西建立100%控股的原料药以及中间体生产基地。公司的主要业务包括：医药关键中间体的CRO/CDMO定制服务，API及关键中间体的小试工艺开发、中试及商业化生产，API相关工艺杂质、降解杂质的研究工作并可以提供相关杂质对照品。欢迎伙伴企业来电洽谈业务合作。
本站仅提供存储服务，所有内容均由用户发布，如发现有害或侵权内容，请
点击举报。
