羧甲基壳多糖对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

【摘要】： 背景：瘢痕疙瘩是皮肤损伤后引发的胶原异常积聚所致的过度瘢痕化，与增生性瘢痕不同表现为过度生长，并超过原伤口界限，侵犯邻近组织，呈瘤样增生，造成功能障碍，是皮肤科等多个学科的难治性疾病。目前尚不能确定其确切的发病机理，也没有理想的治疗药物及方法，其主要问题是难以控制其较高的复发率，大量研究证明，病灶区成纤维细胞参与了该病的发生。目前国内研究的热点是如何抑制或控制这种成纤维细胞的增殖能力来达到治疗瘢痕疙瘩的目的。壳多糖及衍生物因具有良好的组织相容性，并抑制细菌、真菌生长、促进伤口愈合，已成为人工皮肤的理想选择材料，而其对瘢痕疙瘩作用的研究和应用还未见报道。目的：观察羧甲基壳多糖对体外培养的瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的作用，探讨其治疗瘢痕疙瘩的机理，指导临床实践。方法：取新鲜瘢痕疙瘩组织，体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞，应用不同浓度的羧甲基壳多糖作用于3～9代瘢痕成纤维细胞，同时设阴性(无血清培养液)及阳性(曲安萘德)对照组。分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)定量测定法及血球板计数法测定羧甲基壳多糖对瘢痕成纤维细胞增殖的影响，同时采用羟脯氨酸比色法及Ⅲ型前胶原放免试剂盒测定不同浓度羧甲基壳多糖作用于瘢痕成纤维细胞后其上清液中胶原及Ⅲ型前胶原含量，最后将羧甲基壳多糖制成药膜，观察瘢痕成纤维细胞在其中生长情况。结果：MTT结果提示：与阴性对照组比较，羧甲基壳多糖在较低浓度(10μg／ml，50μg／ml，100μg／ml)作用24小时，对瘢痕成纤维细胞增殖无明显抑制作用(P＞0.05)。当延长作用时间至48小时、72小时后，三种浓度羧甲基壳多糖对瘢痕成纤维细胞增殖有明显抑制作用(P＜0.05)。当羧甲基壳多糖浓度增至200μg／ml，在24小时、48小时、72小时观察均显示明显抑制增殖作用(P＜0.05)。上述抑制作用随羧甲基壳多糖浓度增高或作用时间的延长而加强。呈明显的剂量依赖关系和时间依赖关系。羧甲基壳多糖浓度为200μg／ml作用24h、48h、72h对瘢痕成纤维细胞增殖抑制作用与曲安萘德组相比无显著差异(P＞0.05)。血球板计数法显示了与MTT法相一致的结果。羟脯氨酸比色法结果提示与阴性对照组相比，务实验浓度的羧甲基壳多糖(10μg／ml，50μg／ml，100μg／ml，200μg／ml)对瘢痕成纤维细胞作用48小时后， 中文摘要 能够明显抑制该细胞胶原的合成与分泌。(P0.01)，但这种抑制作用与阳性对照 组曲安蔡德组相比亦有显著性差异(P0.01)。用放射免疫法测定上清液中m型前 胶原结果显示:梭甲基壳多糖在较低浓度时(10拼创饥1，50ILg/ml)对瘫痕成纤维细 胞fll型前胶原的合成与分泌无明显抑制作用(P0.05)，在较高浓度对疲痕成纤维 细胞m前胶原的合成与分泌有明显抑制作用(P0.05)，这种抑制作用与阳性对照 组无明显差异(P闭.05)。结论:梭甲基壳多糖对体外培养的瘫痕成纤维细胞增殖 有明显抑制作用，抑制作用随梭甲基壳多糖浓度的增高或作用时间的延长而加强， 呈明显的剂量依赖关系和时间依赖关系，狡甲基壳多糖能够明显抑制瘫痕成纤维 细胞胶原的合成与分泌，这种抑制作用也随浓度的增高而加强。在较高浓度时可 以抑制瘫痕成纤维细胞中m型胶原的合成与分泌。