“四大利器”做好PCR产物污染预防

概况

PCR产物污染与防治（二）

文/邹利平

编辑/文尤军

字数/1000+

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PCR产物污染预防的四大利器

一：规范行为

建立PCR实验SOP，规范实验人员行为。

实验员严格遵守操作流程，在操作上最大程度地降低人为因素可能导致的PCR污染或杜绝污染的出现。另外实验员应当具备相应的专业知识和技能，包括熟练操作相关设备、明确整个工作流程、掌握出现污染情况的处理方法和实验室质量控制方法，以及能够正确解释检测结果。

二：规范实验室

建立标准的PCR实验室。

PCR实验室原则上分为四个区域，即试剂准备区、样品处理区、扩增区、扩增产物分析区，前两区为扩增前区，后两区为扩增后区。扩增前区与扩增后区应严格分开。实验材料、试剂、记录纸、笔、清洁材料等，只能从扩增前区流向扩增后区，即从试剂准备区→样品处理区→扩增区→扩增产物分析区，不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区，不得逆向流动。理想的PCR实验室设计如下图：

图A：缓冲间为负压的理想PCR实验室设置模式

图B：缓冲间为正压的理想PCR实验室设置模式

图A和图B所给出的PCR实验室设置图应是较为理想的设置模式，有条件的实验室可参照此种模式设计。对于一般的普通实验室，建议PCR扩增区和产物分析区能够分隔开，在样本制备区和PCR扩增区尽可能地减少开盖操作。切记：产物分析区的产物及实验用品严禁拿到样本制备区和PCR扩增区。

三：减少实验步骤

 如果实验室只是进行PCR检测鉴定，建议使用荧光定量PCR取代常规PCR。

荧光定量PCR检测结果可以通过荧光信号采集分析，因此反应结束后不需要开盖电泳，避免了反应产物泄露形成气溶胶而造成的PCR产物污染。如果进行凝胶电泳上样步骤时增加开盖次数，易产生气溶胶污染。建议推进定量PCR的应用，并逐步替代定性PCR。

四：采用UNG防污染体系

采用UNG防PCR产物污染体系进行PCR反应。

体系采用dUTP取代dTTP，PCR反应之后，所有的PCR产物(DNA 片段)均掺有了dUTP；在下一轮PCR反应时，体系中添加的UNG酶，在PCR前37°C孵育5min，能特异的降解所有含有dUTP的DNA片段，之后再进行PCR反应。这样能完全去除由PCR产物引起的气溶胶污染。效果见下图：

注：直接PCR系列可以选用福际生物的防PCR产物污染体系系列产品

建议

对于大规模进行基因分型检测的实验室，强烈推荐在建设合理的实验室之外，检测试剂使用UNG防PCR产物污染体系。

提醒：该体系的使用不能清除已经造成的PCR产物污染，所以在一开始进行相关检测时，就应使用UNG体系，并一直使用UNG体系进行PCR扩增，这样就可以杜绝PCR产物污染带来的假阳性。

推荐在进行大规模检测时，使用福际生物的Direct PCR-UNG体系，如：

Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；

Plant Seed Direct PCR Kit-UNG；

Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG。

福际生物该系列试剂盒不仅能快速、大规模的进行PCR检测，还能有效的防治PCR产物污染。

本期PCR污染与防治专题第二部分就为大家介绍到这里，下期为大家带来的是第三部分“PCR产物污染的治理”，敬请期待！

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