Western杂交（抗原—抗体杂交）

 2010-04-15 18:05:10 

  检测目的基因是否进入到受体细胞的方法，一般包括分子水平检测和个体水平检测。其中分子检测有3个层次：1目的基因是否整合到受体细胞染色体DNA上，2目的基因是否转录出MRNA，3目的基因是否翻译出蛋白质。1和2都可以用DNA分子杂交技术检测，3可以用抗体-抗原的方法检测。个体水平的检测包括抗虫、抗病的接种实验，以确定是否具有抗性及抗性的程度；基因工程产品需要与天然产品的功能进行活性比较等。

 stern杂交──蛋白质分子（抗原—抗体）之间的杂交。它是检测目的基因是否表达出蛋白质的一种方法。

　　具体做法是：

　　第一步，将目的基因在大肠杆菌中表达出蛋白质；

　　第二步，将表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出抗体（一抗）；

　　第三步，从转基因生物中提取蛋白质，走凝胶电泳；

　　第四步，将凝胶中的蛋白转移到硝酸纤维素膜上；

　　第五步，将抗体（一抗）与硝酸纤维素膜上的蛋白杂交，这时抗体（一抗）与目的基因表达的蛋白（抗原）会特异结合。

　　由于这种抗原—抗体的结合显示不出条带，所以加入一种称为二抗的抗体，它可以与一抗结合，二抗抗体上带有特殊的标记。如果目的基因表达出了蛋白质，则结果为阳性。