磁珠法PCR产物纯化回收试剂盒说明书

 

 

Magbind PCR Purification Kit

目录号：YJ2516

运输条件：室温（15-25℃）。

保存条件：MBPure 2-8℃保存，其他组分室温（15-25℃）保存。

组分说明

 

                       Size          5 ml       60 ml

                       MBPure        5 ml       60 ml

                       Buffer PW    12 ml     3×48 ml

                       Buffer EB     6 ml       60 ml

 

 

              本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途

 

               上海研谨生物中国高端生物试剂生产商  

 

 

产品简介

 

　　本试剂盒提供了一种简单、快速、高效的核酸纯化方法。MBPure与样品按一定比

例混合后，磁珠选择性的将核酸吸附。漂洗后，洗脱得到的DNA纯度高，A260/A280                                   的比值在1.7-1.9之间，A260/A230的比值通常在2.0以上。经该试剂盒纯化得到的  DNA适用于测序，克隆等下游实验。

试剂盒说明

 

      Sample type         Typical yield     Sample type        Typical yield

      5000 bp segment      Up to 90%      1000 bp segment       Up to 90%

      500 bp segment       Up to 80%       200 bp segment       Up to 80%

 

纯化回收得率的计算

 

   我们建议通过琼脂糖电泳纯化前后的样品进行回收得率的计算。我们不建议通过

260 nm处的光吸收值来计算回收得率。因为溶液中单链、双链DNA和dNTP以及一些纯

化前的某些杂质在260 nm处都有光吸收，这样在计算回收前样品中 DNA浓度时会得到

一个假的、虚高的DNA浓度值。

实验前准备及重要注意事项

1．严禁冰冻、离心。冰冻、离心可能会对磁珠造成不可逆的损害。

2．磁珠长期放置后会聚集成团，从而使磁珠表面积减小，降低样品回收得率，使用前

   一定要涡旋振荡彻底混匀磁珠（这一过程通常需要涡旋振荡20秒）。

3．本试剂盒不适用于纯化回收小于100 bp的DNA片段，如果要回收小于100 bp的DNA

   片段，可将MBPure的用量增加到样品体积的4倍。

自备仪器

1．恒温混匀仪——建议使用Eppendorf设计生产的Thermomixer。

2．磁力架——建议使用DynaMagTM-2(Cat. No. 12321D)。

 

操作步骤（手动）

 

   1．涡旋振荡MBPure 20秒，使其彻底混匀为均一溶液。

   2．向1.5 ml的离心管中加入待纯化的PCR产物或其他DNA样本，然后加入2倍样品体积的MBPure。涡旋振荡混匀后，室温下在1400 rpm的Thermomixer上振荡5分钟。

 

注意：如无Thermomixer，可将离心管连续颠倒混匀10分钟。

   3．将上一步的离心管放于磁力架上，直至磁珠完全吸附（约需1分钟）。

   4．保持离心管固定于磁力架上，弃去溶液，期间避免接触磁珠。

   5．向上一步的离心管中加入500 μl Buffer PW后，将离心管从磁力架上取下，涡旋振荡

      10秒钟后将离心管重新放回磁力架。静置1分钟，待磁珠完全吸附于离心管侧壁后彻底弃去漂洗液。

   6．重复步骤5。

   7．保持离心管固定于磁力架上静置放置10分钟，使乙醇完全挥发干净。

      注意：如果磁珠干燥过度会极大的降低DNA的回收得率。

   8．将离心管从磁力架上取下，加入20-100 μl Buffer EB，涡旋振荡将磁珠重悬于洗脱液

      中后将离心管放于65℃、1400 rpm的Thermomixer上振荡洗脱5分钟。

注意：如无Thermomixer，可将离心管放于65℃水浴锅或金属浴中孵育。孵育期间每隔2分钟涡旋震荡5秒钟。

   9．将离心管放于磁力架上直至磁珠完全吸附（约需1分钟）。

   10.将洗脱液转移至一个新的1.5 ml离心管中。此时，可弃去磁珠。