在现代医学中，检验医学已经远远超出了单纯辅助临床诊断的认识范围。随着现代医学的不断发展，临床检验的范围日益广泛，检验的项目越来越多。在或止血实验室中最基本的设备就是血液凝固分析仪。利用血凝仪进行血栓与止血的实验室检查，可为出血性和血栓性疾病的诊断、溶栓和抗凝治疗的监测及疗效观察提供有价值的指标。血栓与止血的检测已从传统的手工方法发展到应用全自动血凝仪，从单一的凝固法发展到免疫法和生物化学法，血栓与止血的检测也因此变得简便、迅速、准确、可靠。目前，自动血凝分析仪已经从第一代单纯使用终点法的半自动单通道血凝分析仪、第二代使用多通道和多种测定原理与方法的半自动血凝分析仪，发展到第三代全自动血凝仪，可迅速定量分析与凝血、抗凝及纤溶有关的多种因子。
凝血时间是指血液自血管抽出放入试管中，从液态的溶胶状态变为半固体凝胶状态所需要的时间。为了避免手术中出血，在患者手术前要进行血液凝固项目的检测。由于影响止血的因素很多，因此以往常规中用出血时间和凝血时间作为诊断指标，其结果异常时再进一步做较复杂的试验寻找病因。此外，凝血时间可作为某些疾病的筛查依据。
1，血液凝固分析仪的检测原理
目前开展的血栓或止血成分检测方法，主要方法有凝固法、底物显色法、免疫法等。凝固法是血凝分析仪和血栓或止血实验中最基本、最常用的方法。
2.1凝固法及其分类
凝固法按测量原理可分为电流法、光学法和磁珠法3类。由于光学法几乎可涵盖各种检测方法，为了降低仪器制造成本，全自动血凝仪以光学法居多。凝固法是通过检测血浆在凝血激活剂作用下的一系列物理量(光、电、机械运动等)的变化，再由数模转换分析得到最终结果，所以也可将其称作生物物理法。
2.1.1电流法
电流法利用纤维蛋白原无导电性而纤维蛋白具有导电性的特点，将待测样品作为电路的一部分，根据凝血过程中电路电流的变化来判断纤维蛋白的形成。
2.1.2光学法
光学法血凝仪是根据凝固过程中浊度的变化来测定凝血功能的。根据仪器不同的光学测量原理，又可分为散射比浊法和透射比浊法两类(如图1所示)。
(1)散射比浊法：散射比浊法是根据待验样品在凝固过程中散射光的变化来确定检测终点的。
(2)透射比浊法：透射比浊法是根据待测样品在凝固过程中吸光度的变化来确定凝固终点的。
2.1.3双磁路磁珠法
测试杯的两侧各有一组驱动线圈，它们产生恒定的交替电磁场，使测试杯内特制的去磁小钢珠保持等幅振荡运动。凝血激活剂加入后，随着纤维蛋白的产生增多，血浆的粘稠度增加，小钢珠的运动振幅逐渐减弱，仪器根据另一组测量线圈感应到小钢珠运动的变化，将运动幅度衰减到50％时确定为凝固终点。
2.2 底物显色法及其原理
底物显色法是通过测定产色底物的吸光度变化来推测所测物质的含量和活性的，该方法又可称为生物化学法。
血凝仪使用产色底物检测血栓与止血指标的原理：通过人工合成具有某种特定作用位点的小段肽，将可水解产生物的化学基团与作用位点的氨基酸相连。测定时由于凝血因子具有蛋白水解酶的活性，它不仅能作用于天然蛋白质肽链，也能作用于人工合成的肽段底物，从而释放出产色基团，使溶液呈色。产生颜色的深浅与凝血因子活性呈比例关系，故可进行精确的定量。目前人工合成的多肽底物有数十种，而最常用的是对硝基苯胺(PNA)，呈黄色，可用405nm波长进行测定。底物显色法特异性及精密度较高，而且易于自动化，为血栓或止血检测开辟了新途径。
2.3 免疫学方法及其原理
在免疫学方法中以纯化的被检物质为抗原，制备相应的抗体，然后利用抗原抗体反应对被检物质进行定性或定量测定。
(1)免疫扩散法：将被测物与相应抗体在一定的介质中结合，测定其沉淀环的大小，与标准进行比较，计算待测物的浓度。此方法适合含量较高的凝血因子的检测。
(2)“火箭”电泳：在一定电场中，凝胶支持物内的被检物与其相对应抗体结合形成“火箭”峰，“火箭”峰的高度与其含量成正比，通过测定峰高并与标准值比较而进行定量测定。此方法操作复杂，临床应用较少。
(3)双向免疫电泳：通过水平与垂直两个方向进行电泳可将某些分子结构异常的凝血因子进行分离。
(4)酶联免疫吸附试验(ELISA法)：用酶标抗原或抗体和被检物进行抗原抗体结合反应，经过洗涤除去未结合的抗原或抗体及标本中的干扰物质，留下固定在管壁的抗原抗体复合物，然后加入酶的底物和色原性物质，经过反应产生有色物质，用酶标仪进行测定，颜色的深浅与被检物浓度水平成比例关系。该方法特异性及敏感度较高，目前已用于许多止血、血栓成分的检测。
(5)免疫比浊法：将被检物质与相应的抗体混合形成复合物，产生足够大的沉淀颗粒，通过透射比浊或散射比浊进行测定。此方法操作简便，准确性好，便于自动化。免疫比浊法可分为直接浊度法分析和乳胶比浊法分析。乳胶比浊法分析是将欲待检物质相对应的抗体包被在直径为15～60nm的乳胶颗粒上，然后与被检物结合，形成抗原抗体复合物的乳胶颗粒凝集，体积增大，使透射光和散射光的变化更为显著，从而提高试验的灵敏度。
2.4 几种检测方法的优缺点
用电流法来判断凝固终点不可靠且单一,所以这种方法很快被更灵敏、更易扩展的光学法所代替。
(1)散射比浊法测定时，当测定含有干扰物(高脂血症、黄疸和溶血)或底纤维蛋白原血症的特殊样本时，由于本底浊度的存在，其作为起始点0％的基线会随之上移或下移，仪器在数据处理过程中用本底扣除的方法来减少这类标本对测定的影响。以牺牲有效信号的动态范围为代价，对于高浊度标本并不完全有效。就浊度测量原理而言，散射比浊法更为合理、准确。这类仪器的光源、样品、接收器成直角排列，接收器得到完全浊度测量所需的散射光。而在透射比浊法中，光源、样品、接收器呈一直线排列，接收器得到的则是很强的透射光和较弱的散射光，前者是有效成分，后者应扣除，因此要进行信号校正，并按经验公式换算散射浊度。此法仪器简单，但精度较差。
(2)光学法凝血测试的优点在于灵敏度高、仪器结构简单、易于自动化，缺点是样品的光学异常、测试杯的光洁度、加样中的气泡等都会成为测量的干扰因素。光学法血凝仪的最大缺点是遇到有较高初始浊度的样品就无能为力，为了克服样品的干扰，不同型号的光学法血凝仪中采取了各种不同的措施。有的用本底扣除的百分浊度法，这对中、低初始浊度的样品有
补偿作用，但不能解决高浊度样品的测试；有的利用一阶微分的峰值作为凝固终点，但微分处理会引起重复性变差。
(3)双磁路磁珠法进行凝血测试，完全不受溶血、黄疸及高脂血症的影响，即使加样中产生气泡也不会影响测试结果。磁珠法的试剂用量只为光学法的一半，因为在比浊测量过程中，激发光束必须照在测试杯的中间，所以要有足够的试剂量。而在双磁路磁珠法测量中，钢珠在测试杯的底部运动，因此试剂只要覆盖钢珠运动即可。双磁路磁珠法中的测试杯和钢珠都是专利技术，有特殊要求。测试杯底部的弧线设计与磁路相关，直接影响测试灵敏度。小钢珠经过多道工艺特殊处理，完全去掉磁性。在使用过程中，加珠器应远离磁场，避免钢珠磁化。为保证测量的正确性，钢珠应当一次性使用。使用磁珠法进行测量成本较光学法大。
此外，磁珠法在测定时具有一定的局限性：①必须有明显和牢固的凝块形成才能作出判断；②弱凝固反应对结果判断有干扰；③受到外界磁场的影响；④受到血浆黏度的影响；⑤受到很多物理因素的影响；⑥不能开展发色底物和免疫法检测。
3，血液凝固分析仪的质量控制
凝血功能检测大部分是基于测定纤维蛋白形成时间来判断终点的，因此干扰因素较多，为了保证检测结果的准确性以及将结果误差控制在允许的范围内，就必须建立一套完整的质量控制体系。全程的质量控制体系应包括正确的标本采集、适用的实验方法、稳定可靠的试剂和标准品、日常的设备维护等一套程序。
(1)实验室应该对标本采集的注意事项进行详细的规定。止血、凝血系统由一系列的酶和酶原组成，易被激活或变性，因此标本必须按照规定的方法采集，以保存凝血因子的全部特性。(2)实验室需要建立对检测试剂的评价方法。目前，检验科使用的多为商品化的检测试剂，因各厂家试剂的敏感指数不同，导致结果也不尽相同，因此选择检测试剂因掌握以下原则：
①在使用商品试剂时严格按照产品说明进行操作，并对试剂进行重复性和敏感性测试；
②按照实验室要求选择最佳试剂，如有仪器配套试剂应优先选择，以保证检测结果的溯源性。
(3)实验室还要建立仪器校准程序及室内质控程序。按照仪器厂家产品标准对仪器的各项技术指标进行校准，保证仪器处于正常的工作状态，定期使用指定的多水平校准品对仪器进行校准，并建立相应的溯源程序。同时选择多水平质控品，采用满足要求的质控规则进行室内质控，并对室内质控进行周期性评价，保证仪器检测结果的准确性和稳定性。对使用不同检测原理的仪器应建立相应的参考值，并每日核查和记录温育的温度。
(4)实验室需有检测方法的评价准则。同一物质使用不同的检测方法，其结果也往往不同，因此需对不同的检测方法进行验证选取最佳检测方法。
(5)实验室需参加室间质控程序，通过室间质控可进一步保证每个检测项目的准确性。
血液凝固分析仪是一个复杂的整体，其各个环节都会影响检测结果，因此适用的检测原理及全程的质量控制体系将保证测试项目结果的准确性和稳定性。
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