免疫组化的质量控制

来源：安徽医药

作者：张卫琴（合肥市妇幼保健院病理科）

免疫组化染色切片的好坏直接影响着病理医生对其染色结果的判断，进而影响病理诊断，所以制作一张良好的免疫组化切片至关重要，它需要病理医生与病理技师两者间的相互协调，密切配合和共同努力，病理医生选择抗体，设置对照，判读结果，指导技术；而技术人员进行实验操作，保证染色质量。在免疫组化切片的制作过程存在多个环节，每一环节的失误都可能影响最终的检测结果，如抗原保存，蛋白酶消化，增强技术及对抗体的管理、使用和试剂的浓度等等，因此制作一张高质量的免疫组织化学切片是多方面相互配合的结果。为了保证免疫组化染色结果的可靠性，每个实验室都必须进行有效的质量控制，规范免疫组化操作流程与步骤，应注意以下几点：

(1)规范行为技术标准：例如使用中性福尔马林(添加PBS的4%福尔马林) 固定，并且固定及时、烤片不宜时间过长及浸蜡温度不宜过高等等，温度过高会破坏抗原决定簇，产生假阴性；

(2)试剂最佳浓度：试剂最佳浓度的确定受到固定方法、时间、组织处理过程的影响；最合适的稀释度是以得到最大强度的特异性染色和最弱的背景染色为标准；

(3)为了保证免疫染色的质量，主要的步骤便是对照的设立，包括阳性对照、阴性对照和空白对照，须同时设立，以达到最佳的质控效果。对已知存在抗原的阳性对照组，如含抗原的正常组织，最好是使用含少量抗原的瘤组织作为对照，使与所检测切片中的抗原水平趋于一致，而且后者可能含有表达抗原的非瘤组织，可以作为内部对照；阴性对照应用缺乏抗原的组织切片；空白对照可以采用非免疫血清，缓冲液取代初级抗原的位置。总之，只有阳性对照染色阳性，阴性对照组织阴性，这样的免疫组化染色结果才有说服力；

(4)抗原修复的一致性：抗原热修复工具选用微波炉或高压锅，修复温度及修复时间要尽量一致，修复温度至少要达到100℃，且修复总时间不低于15min；修复液的PH值在7.0～8.0之间，如Tris(pH7～8)、EDTA(pH8.0)修复液；

(5)熟悉抗体的阳性定位：每种抗体均有阳性定位，染色之前应确定该抗体阳性位置，是胞浆、胞膜或胞核，如ER、PR、P53、Ki-67定位于细胞核，若胞质或胞膜阳性也为假阳性；CD4、CD5、CD8、CD20、CD30、C-erb B-2等定位于细胞膜，若胞质弥漫阳性或细胞核阳性则为假阳性；还有的抗体可表现为二种阳性反应类型，如