结核感染T细胞检测（T-SPOT.TB）是以特异性抗原为刺激源，应用酶联免疫斑点技术（ELISPOT）诊断结核感染的新方法。

上海长海医院检验科微生物室开展此项目还不到两年的时间，标本量已在日益增加，可以看出临床医生也越来越倾向于选择高灵敏度、高特异性而且快速的检测手段来鉴别诊断结核感染。

T-SPOT.TB是以EL ISPOT 技术检测结核感染的新方法, ELISPOT 技术是近20年发展起来的检测抗原特异性T细胞的技术, 是目前最敏感的检测抗原特异性T细胞的方法之一, 可以检测出1/100000-1/50000外周血单个核细胞(PBMCs)中经某种抗原刺激后释放某种细胞因子的细胞, 经过酶联显色后, 通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数,1个斑点代表1个细胞, 从而计算出抗原特异性细胞的频率。

结核感染后体内长期存在抗原特异性的记忆性T 细胞, 当再次遇到抗原刺激时, 能迅速活化增殖, 释放γ干扰素。基于此原理，英国学者Lalvani 建立了以RD1 编码的结核特异性抗原6 kD早期分泌靶向抗原(early secreting antigen target-6, ESAT-6) 和10 kD培养滤过蛋白(culture filtrate protein-10, CFP-10)为刺激源, 检测外周血中结核特异性释放γ干扰素的T淋巴细胞, 从而诊断结核感染的新方法。T-SPOT.TB 2004年在欧洲、2005年在加拿大被批准使用, 2008年被美国FDA批准应用于临床诊断。

T-SPOT.TB的实验结果清晰, 易于判断。如下图，实验设有空白对照、阳性对照以及以ESAT-6 和CFP-10肽段库作为刺激原的两个实验孔。空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑点数大于20时视为实验有效。T-SPOT.TB的实验结果用每106PBMCs中斑点形成细胞(spot forming cells, SFC s)的数目来描述, 即SFCs/106PBMCs。

根据抗原A或/和抗原B孔的反应判断结果：

（1）检测结果为“阳性”，参照以下标准：

①空白对照孔斑点数为0-5个时，(抗原A或抗原B孔的斑点数)-(空白对照孔斑点数)≥6；

②空白对照孔斑点数为6-10个时，(抗原A或抗原B孔的斑点数)≥2×(空白对照孔斑点数)；

如果上述标准不符合且阳性质控对照孔正常时检测结果为“阴性”

（2）结果解释：

阴性结果：提示患者体内不存在针对结核分枝杆菌特异的效应T淋巴胞。

如出现以下情况，阴性结果不能排除结核分枝杆菌感染的可能：

①因感染阶段不同（如标本是在细胞免疫发生前获取的）引起的假阴性结果；

②少数免疫系统功能不全/基础疾病的情况，如HIV感染者、肿瘤患者、婴幼儿等；

③其它免疫学、实验非正常操作的差异。

阳性结果：提示患者体内存在针对结核分枝杆菌特异的效应T淋巴细胞患者存在结核感染。但是否为活动性结核病，需结合临床症状及其它检测指标综合判断。T-SPOT.TB结果不能作为单独的或是决定性的诊断结核病的依据。虽然ESAT-6和CFP-10在所有BCG菌株，以及绝大多数环境分枝杆菌中缺失，但T-SPOT.TB的阳性结果有可能是堪萨斯、苏氏、戈登或海分枝杆菌的感染引起的。

以下为上海长海医院检验科微生物室该项目的相关介绍：

1、标本采集要求：采集外周静脉血，肝素抗凝采血管5ml*2管，不推荐使用EDTA抗凝管；

2、标本运送与保存：标本采集后及时送检，室温保存时间不应超过4小时，不得冷藏或冷冻；

3、报告时间：2个工作日（周末及节假日除外）；

注：尽量在每周一至周五上午采样，并在上午及时送检，可保证及时报告。

4、收费：600元/人次（上海物价标准）

此外，T-SPOT.TB 在诊断结核感染方面具有良好的敏感性和特异性, 在鉴别活动性结核和潜伏性结核感染、预测结核发病风险方面也具有一定意义,已被越来越多的国家认可并应用于临床诊断。基于结核抗原特异性T 细胞向病变部位集中的特点, T-SPOT.TB技术的检测物已不仅局限于静脉血, 支气管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、脑脊液等也可用于对肺内及肺外结核的诊断。此前，已有临床医生向我们咨询过是否可以检测胸腹水、脑脊液等标本，我相信随着该技术的不断发展，长海医院检验科会不断开展其他相关标本类型的T-SPOT.TB检测项目，给临床医生提供有力参考，指导临床实践。