马春全【摘要】： 本项研究以动物微生态学的理论方法为指导，研究开发了主要用于禽的复合菌种的动物微生态制剂—促生灵；并以促生灵菌液为研究材料，对益生菌制剂对雏鸡的免疫学影响进行了系统动态的研究。结果如下。 1 促生灵菌液的研制 1．1 用厌氧培养方法从健康成年母鸡的直肠内容物中分离5株杆菌、4株链球菌，经细菌生长特性、形态观察、生物化学实验鉴定所获得的5株杆菌为乳酸杆菌；4株链球菌为2株乳酸粪链球菌和2株尿链球菌。根据培养特性和动物安全性试验选择其中的2株乳酸杆菌(LB1、LB2)、1株乳酸粪链球菌(SB1)作为益生菌制剂的生产目标菌种。 1．2 对目标菌的某些生物学特性进行了研究。结果表明，菌株LB1、LB2、SB1对酸有一定的耐受性；对胆汁能够耐受且适应生长；在其繁殖生长过程中能够产酸；对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄葡萄球菌等均有不同程度的抑制作用。 1．3 研制出适合工厂规模生产的成本低廉的发酵培养基和生产工艺流程，为工厂化生产提供了技术保证。 1．4 对生产的促生灵菌液常温避光保存不同时间细菌存活数量进行检测，确定促生灵菌液的有效保存期为一年。 2 益生菌制剂对雏鸡免疫学影响和机理的研究 本项研究采用免疫组织化学、免疫酶方法、间接ELISA方法、MTT方法，首次对服用益生菌制剂雏鸡和对照雏鸡的免疫学变化指标进行了全面系统动态的检测，包括：外周血液的T细胞、B细胞数量和IgG、IgM、IgA含量，以及T、B淋巴细胞的增殖反应；中枢免疫器官胸腺和法氏囊、外周免疫器官脾脏T_(ANAE+)细胞、IgC、IgM、IgA抗体生成细胞数量；T、B淋巴细胞的增殖反应及胸腺、脾脏的IL-2诱生活性；呼吸道和消化道局部粘膜免疫组织哈德尔腺、十二指肠派伊尔氏结和盲肠扁桃体的T_(ANAE+)细胞、IgG、IgM、IgA抗体生成细胞数量和泪液、气管液、肠液、胆汁的IgA、IgM、IgG含量的动态变化规律。旨在深入系统地揭示益生菌的免疫增强作用及其机理。为益生菌的合理开发应用提供重要的科学依据。研究结果发现： 2．1 1日龄雏鸡应用益生菌后，外周血液的B细胞数量、IgG、IgM、IgA含量，均较对照雏鸡不同程度明显增加；雏鸡外周血液中B细胞增殖反应分别于饲喂后7～18天显著高于相应对照雏鸡。表明雏鸡应用益生菌后，外周血液的体液免疫功能明显提高。 2．2 1日龄雏鸡应用益生菌后，血液中T细胞数量和T细胞增殖反应于4～10天较对照组明显增高；表明雏鸡应用益生菌后，外周血液的细胞免疫功能也明显提高。 2．3 1日龄雏鸡应用益生菌后，法氏囊和脾脏的IgG、IgM、IgA抗体生成细胞数量均较 中国农业大学博士学位论文 中文摘要 对照雏鸡不同程度增加，表明雏鸡应用益生菌后，促进了免疫器官免疫发育，免疫器官的体液 免疫功能明显提高。 2.41日龄雏鸡应用益生菌后，胸腺、法氏囊和脾脏的T细胞数量较对照雏鸡明显升高; 表明雏鸡应用益生菌后，促进了免疫器官免疫发育，免疫器官的细胞免疫功能明显提高。 2.5首次检测了服用益生菌制剂雏鸡胸腺和脾脏T细胞IL一2诱生活性变化，揭示了益生 菌对雏鸡细胞因子的影响规律，探讨了细胞因子IL一2在益生菌制剂对雏鸡免疫影响中的调节作 用;结果表明，l日龄雏鸡饲喂益生菌制剂后，其胸腺和脾脏T细胞IL一2诱生活性显著高于对 照雏鸡，表明服用益生菌制剂雏鸡细胞因子的免疫调节功能增强。提示IL一2在益生菌制剂促进 雏鸡免疫发育成熟中起重要调节作用。 2.6首次对服用益生菌制剂雏鸡胸腺和脾脏T细胞对ConA增殖反应进行了检测，结果表 明1日龄雏鸡饲喂益生菌制剂后，胸腺和脾脏T细胞对ConA增殖反应明显高于对照雏鸡，表 明雏鸡应用益生菌制剂后，其细胞免疫中枢胸腺、外周免疫效应器官脾脏T淋巴细胞的细胞免 疫功能均明显增强。 2.7对服用益生菌制剂雏鸡法氏囊和脾脏B细胞对PMA增殖反应进行了检测，结果显示， 1日龄雏鸡饲喂益生菌制剂后，法氏囊及脾脏B淋巴细胞对PMA增殖反应显著高于对照雏鸡。 表明雏鸡应用益生菌制剂后，其体液免疫中枢法氏囊、外周免疫效应器官脾脏B淋巴细胞功能 均明显增强。 2.81日龄雏鸡饲喂益生菌制剂后，其胸腺指数、脾脏指数、法氏囊指数不同程度地高于 相应对照雏鸡，表明雏鸡服用益生菌制剂后，促进了免疫器官胸腺、脾脏和法氏囊的发育成熟。 2.91日龄雏鸡应用益生菌后，消化道和呼吸道局部体液—泪液、气管液、肠液和 胆汁的IgA、IgM、lgG含量在4一7天明显高于未服用益生菌雏鸡;局部勃膜免疫组织一 哈德尔腺、盲肠扁桃体和十二指肠派伊尔结的IgA、IgM、IgG生成细胞和T细胞数量在 1一10天明显高于未服用益生菌雏鸡。表明雏鸡应用益生菌后，促进了勃膜免疫组织的发育， 消化道、呼吸道局部豁膜的细胞免疫和体液免疫功能明显提高。 本项研究首次从禽的局部体液免疫球蛋白含量变化、局部组织抗体生成细胞和T细胞数量 变化揭示益生菌的作用机理，为益生菌的开发应用提供了科学的依据，具有重要的理论和实践 意义。
【关键词】：
益生菌制剂复合菌种雏鸡免疫机理【学位授予单位】：中国农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
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