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【热点聚焦】PCR实验

……PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应,是指在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术,能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。

PCR过程分为三步

DNA变性

……(90℃~96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA

退火

……(60℃~65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。

延伸

……(70℃~75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP为原料,从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸,合成与模板互补的DNA链。

……每一循环经过变性退火延伸,DNA含量即增加一倍,现在有些PCR因为扩增区很短,即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度。


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