中药的醇提工艺技术

【摘 要】目的 确定虎杖、当归的最佳醇提工艺条件。方法 以浸膏得率和虎杖苷浸出量为指标，对影响浸出的主要因素进行优化。结果 最佳的提取工艺条件为：加60%的乙醇回流提取2次，加醇量分别为10、8倍，提取时间分别为1.5、1.0 h。结论 优选的提取工艺可为工业化生产提供实验依据。
　　【关键词】中药 工艺
　　【中图分类号】【文献标识码】A【文章编号】1672-5158（2013）02-0343-01
　　虎杖、当归为常用中药，虎杖的化学成分主要为白藜芦醇类[1]、蒽醌类。虎杖苷（白藜芦醇苷）为虎杖中的主要有效成分，具有显著的扩血管作用，对冠状动脉、脑血管、肺血管、肝血管等都有扩张作用，并对血管平滑肌细胞内钙离子、pH具有双向调节作用。在虎杖制剂中，对其有效成分虎杖苷可以采用一定浓度的醇提取。本研究采用正交设计[2-3]的方法，以乙醇为提取溶媒，对该制剂处方中的主要药味虎杖、当归的醇提工艺条件进行优选，为工业化生产提供参考依据。
　　一、仪器与试药
　　LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器；Apollo色谱柱：Apollo C18-A（250mm×4.6 mm，5μm）；N3000色谱工作站；电子分析天平（AY120 Shimadzu0.1mg～120g）；恒温水浴锅（DK-SZZ型）。虎杖、当归药材购自湖南三湘中药饮片有限公司，经检验均为合格药材。虎杖苷（批号111575-200502）由中国药品生物制品检定所提供。乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。
　　二、方法与结果
　　1、虎杖苷含量测定
　　1）色谱条件
　　色谱柱为Apollo C18-A柱（250 mm×4.6mm，5μm）；乙腈-水（23∶77）为流动相；检测波长306nm；流速1.0mL/min；柱温30℃。理论塔板数按虎杖苷峰计算不低于3 000。在此条件下，供试品色谱中虎杖苷与其它组分的色谱峰可达基线分离（见图1）。
　　2）对照品溶液的制备
　　精密称取虎杖苷对照品14.8 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，取1 mL置于10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，即得（虎杖苷的浓度为0.029 6 mg/mL）。
　　3）供试品溶液的制备与测定
　　取各提取液，（指醇提浓度、醇提次数、正交试验、正交验证试验的提取液）用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。精密吸取对照品与供试品溶液适量，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，计算。
　　2、乙醇浓度对浸出量的影响
　　依处方比例称取虎杖、当归，分别加入浓度为40%、50%、60%、70%、80%的乙醇浸泡0.5 h，回流提取2次，加醇量分别为8、6倍，提取时间分别为2.0、1.5 h，分别收集5种不同浓度的提取液，然后测定浸膏得率与虎杖苷的浸出量。结果表明，虎杖、当归以60%乙醇提取，其虎杖苷的浸出量最高。
　　3、提取次数考察
　　按处方比例称取虎杖、当归，加60%乙醇浸泡0.5 h，回流提取3次，加醇量分别为8、6、6倍，提取时间分别为2.0、1.5、1.5 h，收集合并第1、2次提取液，定容，再收集第3次提取液，定容，测定虎杖苷的浸出量。结果表明，第3次提取的浸膏得率与虎杖苷浸出量均小于3次总量的10%，故提取2次即可。
　　4、正交试验优选醇提工艺
　　1）试验设计
　　在确定醇提浓度与提取次数的基础上，采用正交试验法对虎杖、当归提取的其它工艺条件进行优选。选择浸泡时间、加醇量、提取时间作为考察因素，以浸膏得率与虎杖苷浸出量为评价指标，用L9（34）正交表安排试验。
　　2）试验结果
　　依处方比例称取虎杖25.0 g、当归10.0 g，共9份，根据表2安排试验。由直观分析可知，以浸膏得率为评价指标，A、B、C三因素的极差（R）与离差平方和（Sj）均少于空白列相应的值，故可认为各因素对浸出均无影响。而以虎杖苷浸出量为评价指标，由直观分析可知，其最佳提取工艺条件为A2B3C1，各因素的主次顺序为B、C、A，其中B、C因素经方差分析表明，对虎杖苷浸出量有极显著性影响，A因素影响不明显（方差分析中，考虑A因素的SA比空白列的S空白小，故认为A因素对虎杖苷浸出量没有影响，并将SA与S空白合并作为误差估计，以提高分析的精确度，见表3）。根据上述分析，A因素无论是以浸膏得率还是以虎杖苷浸出量为指标，其对浸出均未见明显的影响，故可任取一个水平，为缩短生产时间，取A1为佳；B、C因素在上述2种评价指标中，均以B3、C1为佳。因此，可确定醇提工艺的最优条件为A1B3C1，即提取时加60%乙醇浸泡0.5 h，提取2次，加醇量分别为药材的10、8倍，提取时间分别为1.5、1.0 h。
　　3）验证试验
　　由于优选的醇提工艺条件A1B3C1在正交表中没有出现，因此必须进行实验予以验证。
　　按处方比例称取虎杖25 g、当归10g，按优选方案（A1B3C1）加60%乙醇进行提取，收集提取液，定容，测定浸膏得率及虎杖苷的浸出量。结果表明，优选方案（A1B3C1）重复3次试验的虎杖苷浸出量均稍高于正交表中浸出量最高的6号方案，从而证明这一方案合理可行。
　　三、讨论
　　正交试验设计是研究多因素多水平的一种设计方法，它是根据正交性从全部试验中挑选出部分有代表性的点进行试验，这些有代表性的点具备了“均匀分散，齐整可比”的特点，是一种高效率、快速、经济的试验设计方法。
　　醇提提取工艺试验中，选用君药的有效成分虎杖苷作为提取的评价指标，客观地反映了提取工艺的优劣。通过正交试验等确定了醇提最佳工艺条件为：以60%的乙醇浸泡0.5 h，加热回流提取2次，加醇量分别为10、8倍，提取时间分别为1.5、1.0 h。虎杖苷提取率达83.5%，基本提取完全。
　　本试验采用的虎杖苷含量测定方法，条件比较稳定，出峰时间短，分离效果好，可用于虎杖及其制剂的含量测定。
　　参考文献
　　[1] 周文龙，耿强，夏新华，虎杖、当归醇提工艺研究，论文网，2011，04
　　[2] 杨西岳.虎杖及白藜芦醇的开发[J].天然产物分离，2005，3（3）：16-18
　　[3] 张 峻.正交试验法优化虎杖提取工艺的实验研究[J].中国药学杂志， 2003，38（2）：154
　　[4] 谢 扬，朱秋华，刘瑞源，等.正交实验筛选虎杖甙提取工艺[J].中药材， 2004，27（9）：678-679
论文来源：《中国信息化·学术版》 2013年第2期
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