【摘 要】目的 确定虎杖、当归的最佳醇提工艺条件。方法 以浸膏得率和虎杖苷浸出量为指标,对影响浸出的主要因素进行优化。结果 最佳的提取工艺条件为:加60%的乙醇回流提取2次,加醇量分别为10、8倍,提取时间分别为1.5、1.0 h。结论 优选的提取工艺可为工业化生产提供实验依据。
【关键词】中药 工艺
【中图分类号】【文献标识码】A【文章编号】1672-5158(2013)02-0343-01
虎杖、当归为常用中药,虎杖的化学成分主要为白藜芦醇类[1]、蒽醌类。虎杖苷(白藜芦醇苷)为虎杖中的主要有效成分,具有显著的扩血管作用,对冠状动脉、脑血管、肺血管、肝血管等都有扩张作用,并对血管平滑肌细胞内钙离子、pH具有双向调节作用。在虎杖制剂中,对其有效成分虎杖苷可以采用一定浓度的醇提取。本研究采用正交设计[2-3]的方法,以乙醇为提取溶媒,对该制剂处方中的主要药味虎杖、当归的醇提工艺条件进行优选,为工业化生产提供参考依据。
一、仪器与试药
LC-10AT高效液相色谱仪,SPD-10A紫外检测器;Apollo色谱柱:Apollo C18-A(250mm×4.6 mm,5μm);N3000色谱工作站;电子分析天平(AY120 Shimadzu0.1mg~120g);恒温水浴锅(DK-SZZ型)。虎杖、当归药材购自湖南三湘中药饮片有限公司,经检验均为合格药材。虎杖苷(批号111575-200502)由中国药品生物制品检定所提供。乙腈为色谱纯,水为重蒸水,其余试剂均为分析纯。
二、方法与结果
1、虎杖苷含量测定
1)色谱条件
色谱柱为Apollo C18-A柱(250 mm×4.6mm,5μm);乙腈-水(23∶77)为流动相;检测波长306nm;流速1.0mL/min;柱温30℃。理论塔板数按虎杖苷峰计算不低于3 000。在此条件下,供试品色谱中虎杖苷与其它组分的色谱峰可达基线分离(见图1)。
2)对照品溶液的制备
精密称取虎杖苷对照品14.8 mg,置100 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,取1 mL置于10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,即得(虎杖苷的浓度为0.029 6 mg/mL)。
3)供试品溶液的制备与测定
取各提取液,(指醇提浓度、醇提次数、正交试验、正交验证试验的提取液)用0.45 μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。精密吸取对照品与供试品溶液适量,注入高效液相色谱仪,测定峰面积,计算。
2、乙醇浓度对浸出量的影响
依处方比例称取虎杖、当归,分别加入浓度为40%、50%、60%、70%、80%的乙醇浸泡0.5 h,回流提取2次,加醇量分别为8、6倍,提取时间分别为2.0、1.5 h,分别收集5种不同浓度的提取液,然后测定浸膏得率与虎杖苷的浸出量。结果表明,虎杖、当归以60%乙醇提取,其虎杖苷的浸出量最高。
3、提取次数考察
按处方比例称取虎杖、当归,加60%乙醇浸泡0.5 h,回流提取3次,加醇量分别为8、6、6倍,提取时间分别为2.0、1.5、1.5 h,收集合并第1、2次提取液,定容,再收集第3次提取液,定容,测定虎杖苷的浸出量。结果表明,第3次提取的浸膏得率与虎杖苷浸出量均小于3次总量的10%,故提取2次即可。
4、正交试验优选醇提工艺
1)试验设计
在确定醇提浓度与提取次数的基础上,采用正交试验法对虎杖、当归提取的其它工艺条件进行优选。选择浸泡时间、加醇量、提取时间作为考察因素,以浸膏得率与虎杖苷浸出量为评价指标,用L9(34)正交表安排试验。
2)试验结果
依处方比例称取虎杖25.0 g、当归10.0 g,共9份,根据表2安排试验。由直观分析可知,以浸膏得率为评价指标,A、B、C三因素的极差(R)与离差平方和(Sj)均少于空白列相应的值,故可认为各因素对浸出均无影响。而以虎杖苷浸出量为评价指标,由直观分析可知,其最佳提取工艺条件为A2B3C1,各因素的主次顺序为B、C、A,其中B、C因素经方差分析表明,对虎杖苷浸出量有极显著性影响,A因素影响不明显(方差分析中,考虑A因素的SA比空白列的S空白小,故认为A因素对虎杖苷浸出量没有影响,并将SA与S空白合并作为误差估计,以提高分析的精确度,见表3)。根据上述分析,A因素无论是以浸膏得率还是以虎杖苷浸出量为指标,其对浸出均未见明显的影响,故可任取一个水平,为缩短生产时间,取A1为佳;B、C因素在上述2种评价指标中,均以B3、C1为佳。因此,可确定醇提工艺的最优条件为A1B3C1,即提取时加60%乙醇浸泡0.5 h,提取2次,加醇量分别为药材的10、8倍,提取时间分别为1.5、1.0 h。
3)验证试验
由于优选的醇提工艺条件A1B3C1在正交表中没有出现,因此必须进行实验予以验证。
按处方比例称取虎杖25 g、当归10g,按优选方案(A1B3C1)加60%乙醇进行提取,收集提取液,定容,测定浸膏得率及虎杖苷的浸出量。结果表明,优选方案(A1B3C1)重复3次试验的虎杖苷浸出量均稍高于正交表中浸出量最高的6号方案,从而证明这一方案合理可行。
三、讨论
正交试验设计是研究多因素多水平的一种设计方法,它是根据正交性从全部试验中挑选出部分有代表性的点进行试验,这些有代表性的点具备了“均匀分散,齐整可比”的特点,是一种高效率、快速、经济的试验设计方法。
醇提提取工艺试验中,选用君药的有效成分虎杖苷作为提取的评价指标,客观地反映了提取工艺的优劣。通过正交试验等确定了醇提最佳工艺条件为:以60%的乙醇浸泡0.5 h,加热回流提取2次,加醇量分别为10、8倍,提取时间分别为1.5、1.0 h。虎杖苷提取率达83.5%,基本提取完全。
本试验采用的虎杖苷含量测定方法,条件比较稳定,出峰时间短,分离效果好,可用于虎杖及其制剂的含量测定。
参考文献
[1] 周文龙,耿强,夏新华,虎杖、当归醇提工艺研究,论文网,2011,04
[2] 杨西岳.虎杖及白藜芦醇的开发[J].天然产物分离,2005,3(3):16-18
[3] 张 峻.正交试验法优化虎杖提取工艺的实验研究[J].中国药学杂志, 2003,38(2):154
[4] 谢 扬,朱秋华,刘瑞源,等.正交实验筛选虎杖甙提取工艺[J].中药材, 2004,27(9):678-679
论文来源:《中国信息化·学术版》 2013年第2期
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