我叫骨头，这是我进组以来第一次挨骂。好吧我想这样下去的话，以后挨的骂会更多。老板居然说我免疫组化没有设置对照，我想了好久，加一组对照好麻烦的嘛，我这也不是为了老板您省钱么？
杀姐姐：当然有问题咯……正确的试验需要设置正确的对照，这是不能嫌麻烦的。对照可以显示你的实验结果的真正含义，以及你不做任何处理时试验会发生的一切，使整个实验处于一个可控制的范围。对照不能只做一次，而是每次试验都需要进行重复，因为你不能预期每次实验中产生的变量有哪些，就需要用对照来控制这些变量。所以对照一般叫“Control”。
骨头：师兄，道理我都懂，就是对照嘛，阳性对照，阴性对照，呃，也就是空白对照……
杀姐姐：并不是这么简单的。一个实验设置的对照应该是：1）阳性对照，2）阴性对照，3）空白对照，4）Marker（定性实验可以不加，定量的实验应该会有）。阴性对照并不能等同于空白对照。我给你举个例子解释一下，比如这样的实验：检测木瓜对女性的丰胸作用。
首先我们设置一个阳性对照，阳性对照是什么呢？就是必然能达到实验结果的对照，这个简单，就需要有一种已经验证过的，必然能丰胸的药物，施用在某人身上就可以作为阳性对照了。
其次我们要设置阴性对照，隐形对照需要的一种肯定达不到预期结果的处理样本，来进行处理。比如，我们选取了一组女性，用冬瓜进行处理，来作为本次试验的阴性对照。
阳性对照和阴性对照，主要针对的是“试验的预期”，凡是肯定出现预期结果的组，为阳性对照组。凡是肯定不会出现预期结果的组，为阴性对照组。如果一旦阳性对照或者阴性
对照出现了误差，就说明了你的实验可能会有问题，比如这次的阳性对照出现了问题，那就说明你选取的实验对象可能对于“丰胸”这种处理并不敏感，提醒你可能需要更换实验对象，或者说在处理的过程中出现了问题，会导致最终结果的假阴性，这就需要重新调整实验。而你的阴性对照出现了问题，说明不管吃什么，都会对女性产生“丰胸”的效果，说明实验处理会产生假阳性，这样实验的方向也会有偏差，以至于整个实验就会被彻底推翻了。总而言之，阳性对照和阴性对照所针对的，是你实验本身设计层面的问题。
接着我们要说空白对照，这个实验中，选取一组女性，选择啥瓜都不吃。在实验中，空白对照是针对“处理因素”而言的。凡是不加处理因素的组，不加处理因素比如用生理盐水等溶剂代替所要加的溶液，就可以被称为空白对照组。空白对照主要是为了控制整个实验体系中出现的误差或者污染，比如你做一轮PCR，不加引物，或者不加模板，照样扩增出了产物，那说明你的实验体系已被污染，需要重新开始做实验了。
最后，如果是定量实验的话，就需要用Marker，来进行进一步的区分片段大小的，就像是尺子……
…华丽丽的分割线…
李莫愁博士：要做好实验，有两点，第一点是要让实验可重复，第二点就是设置好对照。这两点很多人都不重视，比如有个叫小保方的姐姐，就是没注意实验的可重复性……对照设置也一样。比如做个免疫组化：
1）阳性对照就是指用已证实含有靶抗原的组织切片与待检实验切片同时作同样处理和免疫染色的组织对照，排除假阴性的可能。
2）阴性对照就指用已证实不含靶抗原的同步处理和免疫标记染色的组织对照，主要的目的就是排除可能存在的假阳性。
3）空白对照组又要分成三组：
a）纯空白对照，即选择不加一抗的实验组，或者只加入PBS替代一抗，以此验证实验是否又被污染的可能性；
b）取代对照，即采用和这次实验无关的抗体取代一抗，其他步骤不变的试剂对照染色，结果应为阴性；
除了以上者两种常见的免疫组化的空白对照，还有：
c）吸收试验，即事先用一抗上清液过量地与抗原接触吸收反应，然后用这样的已经吸收过量抗原的一抗上清液来取代第一抗体，其他步骤不变的免疫染色试剂对照。结果应是阴性或阳性着色明显减弱；
d）抑制试验，即用标记的和未标记的一抗或者二抗，来进行免疫组化染色，结果其阳性着色应成比例的减弱，这种一般会用与直接法免疫组化的对照，现在这种方法基本已经被抛弃了。
好了，我相信，这么一说，大家对免疫组化的对照选择更是一头雾水了。但就记住一般的实验，必须要设置阳性对照，阴性对照和空白对照就OK了。好了，今天就策到这里吧。
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