1985年，王二妮出生在榆林市榆阳区大河塔乡冯家湾村，自幼能歌善舞。13岁时，父母把她送进榆林市百花艺术学校，学了两年戏曲舞蹈专业。
1999年，刚刚组建的安塞县艺术团到榆林招收演艺人才，王二妮和同班的十多个同学便成为安塞县艺术团的第一批成员。这一年，名不见经传的她参加了延安市青年歌手大奖赛，获得了头等大奖。
2000年，参加陕西省MTV民歌大奖赛，比赛中荣获三等奖。
2000年，随团到广西南宁参加艺术节。
2001年初，王二妮代表安塞县去北京参加“首届农民歌手大赛”，获得了第一名的好成绩。
2002年，春节随团到香港海洋公园表演；参加陕西省第三届艺术节。
2003年，随团到浙江嘉兴参加艺术节，并参加陕西省第五届农民运动会。2004年，代表中国到泰国参加表演；到青海参加“青岛啤酒百年华诞”表演。
2005年，除夕参加延安通往北京的“红色专列”首届春节联欢晚会。
2006年，参加“陕西省第四届艺术节”并参加庆祝建党85周年十大城市晚会。
2007年，参加全国建党86周年党的十七大大型歌舞晚会等。同年，参加中央电视台《星光大道》节目，进入年度总决赛。
2008年，参与录制中央电视台《乡村大世界》，节目中客串第二现场主持人；9月26日，中央电视台《梦想剧场》节目组破例为王二妮做了个人专场。
2009年，演唱国庆献礼电视剧《东方红》片尾曲《山丹丹开花红艳艳》。演唱音乐人冯晓泉新编《东方红》试听版，在十一期间，网络点击率一周之内突破10万。同年，参加王昆从艺七十周年师生演出会 。
2011年10月7日，CCTV—3《巅峰音乐汇》王二妮专场开演，这是王二妮首次在央视的个人演唱会，央视节目检测部门统计，王二妮个人演唱会创造了国庆七天乐收视率第一的名次。
2012年，被点时唱片重金签约。应邀参加第二界中国孙思邈中医药文化节，演唱歌曲《山丹丹开花红艳艳》。9月15日，参加山西临汾举办的《中国尧都首届尧文化旅游节开幕式》，演唱《东方红》。11月30日，在北京昌平一个山区农村拍摄《大辫子》MV。
2013年1月5日，加入北京歌剧舞剧院。1月18日，受邀参加中组部的“茶话会”节目录制。9月18日，受邀在新加坡举办了“艺满中秋”个人首场音乐会。9月28日、29日参加名家荟萃演出《京韵华彩》。
2014年1月，与王大治主演的电影《哭恋》在中国上映。在2014年央视马年春晚搭档阿宝演唱歌曲《张灯结彩》。7月21日，携专辑首发单曲《故乡》参加央视经典访谈节目《艺术人生》暑期特别节目——《时间都去哪儿了》的录制。
2015年1月，推出第二张专辑《我从西边来》。7月5日起，王二妮与《走进黄土地》文化采风团成员来到陕西采风，拜访音乐家赵季平。9月3日，参加《胜利与和平》人民大会堂大阅兵晚会；9月15日，在北京国家大剧院参演“历史的回声”——抗战歌曲音乐会暨《抗战歌选》首发式；10月31日，在澳门文化中心小剧院参演第二十九届澳门国际音乐节《黄土谣》专场音乐会；11月3日，在香港新光戏院大剧场举办“黄土地的诉说”王二妮民歌音乐会。11月29日，王二妮受邀参演中央电视台《共筑中国梦》歌曲演唱会；12月5日，在人民大会堂举办《黄土地的诉说》演唱会。
2016年6月16日，推出单曲《三妮儿的笑》。9月12日，2016央视中秋晚会节目单公布，王二妮在列。9月15日，在西安大唐芙蓉园参加中央电视台中秋晚会。10月，推出单曲《妈妈教我信天游》。同年登上中央电视台“春节联欢晚会”的舞台，搭档贠恩凤、王向荣演唱《山丹丹开花红艳艳》。10月1日，参加中央电视台《江山如画——2016国庆交响音乐会》。11月30日，王二妮作为民族歌唱家的代表参加在北京人民大会堂隆重开幕的中国文学艺术界联合会第十次全国代表大会、中国作家协会第九次全国代表大会， 并成为中国文联第十届全国文联委员会委员中的两位监票员之一。并在文代会代表联欢晚会中同郭兰英、张也一起登台献唱。
2017年1月12日，推出单曲《吉祥中国年》和《过年的味道》；2月11日，登上中央电视台元宵晚会与杜朋朋、正月十五组合、蜜蜂少女队等共同演唱开场歌舞《正月十五闹花灯》；5月11日，推出个人EP专辑《丰收中国》，专辑《盼乡音》《丰收中国》《黄土地上》《又唱走西口》《丫蛋蛋》五首原创歌曲。6月，作为特邀嘉宾助阵《魅力中国城》红色魅力城市延安竟演；9月3日，参与录制《中国戏歌》，演唱《五哥放羊》；9月15日，参与拍摄并主演红色主旋律电视剧《奔向延安》，饰演角色柳二妮 ；9月22日，录制央视综艺频道《巅峰音乐汇》王二妮个人专场音乐会 ；9月28日-10月10日，王二妮和王小妮随国务院侨办“文化中国”一行来到美国，分别在波士顿、纽约、华盛顿、圣保罗、辛辛那提五个城市，为当地侨胞奉献了六场演出；10月15日，随中国文联前往德国参加中德建交45周年“莱茵华韵”文艺晚会 ；11月1日，推出两首单曲《在延安》和《荞麦花》 。
2018年1月20日，参加“百花迎春——中国文学艺术界2018春节大联欢”。2月，推出贺岁单曲《新年到》。3月13日，发行专辑《蓝盈盈的天来想亲亲难》。4月10日，发行专辑《妹子儿生来爱唱歌》。
| 作品名称 | 时间 | 扮演角色 | 演出场所 |
|---|---|---|---|
《白毛女》 | 2011年 | 喜儿 | 国家大剧院 |
王二妮担任中国陕北民歌研究会会员、陕西省音乐家协会会员、陕西省安塞县音乐舞蹈家协会副主席兼秘书长、陕西省延安市政协委员、陕西省政协委员、陕西省音乐家协会会员、代表陕西省参加全国第十六次团代会。
2015年6月16日，中国音乐家协会第八次全国代表大会在北京召开，王二妮当选为中国音乐家协会理事。
2017年11月30日，荣获“陕西省普法宣传公益大使”奖。
2015年2月1日，王二妮和“红都组合”搭档，参加央视公益音乐节目《梦想星搭档》，为听障儿童募集公益基金，为无声世界的孩子早日听到爱的呼唤贡献一份自己的力量；7月16日晚，王二妮参加了百位明星关注留守儿童“一带一路”万里行公益歌曲的录制；9月21日，由陕西榆林市委、市政府主办，“王二妮助学基金”成立新闻发布会在榆林市委会议室举行。王二妮捐赠20万元作为“王二妮助学基金”的首笔善款。
2016年8月22日，王二妮捐赠了20万元作为“王二妮助学基金”的首笔善款，资助了35名考上大学的优秀寒门学子和20名优秀中小学生；8月23日，王二妮和妹妹王小妮赶到了自己的家乡大河塔乡，慰问家乡的留守老人和儿童。
2017年9月1日，王二妮助学基金资助了70名优秀寒门学子。
王二妮单纯，不加雕琢的天籁之音，带着陕北人淳朴古厚之风，带着陕北原汁原味的原生态唱法。她被陕北人誉为“无冕之王”。（腾讯娱乐、搜狐音乐综合评）
王二妮从人民中来，质朴是她的人格底色，她的音乐与人民同在，为人民歌唱，用来源于人民的音乐回馈人民。她扎根于中华文化沃土，民族性是她音乐的灵魂。她个性鲜明地演唱 “中国风”的音乐，彰显民族特色和民族风格。（凤凰音乐综合评）
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