非光敏中药组方外用治疗白癜风有效的机制研究

目的通过动物实验,探讨女贞子、黑胡椒等组成的非光敏中药组方(中药2号:女贞子、黑胡椒、浮萍、透骨草、乌蕨)外用治疗白癜风有效的可能机制;通过细胞实验,进一步研究酪醇和胡椒碱——分别为女贞子和黑胡椒的重要单体,影响黑素合成的可能分子机制。方法(1)动物实验:中药2号乙醇提取液外搽大鼠背部皮肤,并以75%乙醇外搽作为阴性对照,4周后取组织活检;采用免疫组化检测大鼠表皮中S100、干细胞因子受体(c-KIT)和蛋白酶激活受体-2(PAR-2)表达量的变化。(2)细胞实验:中药单体酪醇和胡椒碱作用于小鼠B16黑素瘤细胞48或72小时,并以相应溶媒作为对照;采用MTT法测定细胞增殖,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,氢氧化钠裂解法测定黑素含量,免疫组化法检测c-KIT和酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)蛋白的表达。结果(1)与75%乙醇外搽相比,中药2号外搽后S100阳性细胞数无显著性差异(P＞0.05);c-KIT、PAR-2阳性细胞数均有增加,差异有显著性(P＜0.05)。(2)浓度为25μg/mL的酪醇作用后,B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性、黑素合成能力均增强(P＜0.05),c-KIT和TRP-2蛋白表达量分别比空白对照组增加9.50%(P＜0.05)和9.16%(P＜0.01);浓度为12.5μg/mL的胡椒碱对B16黑素瘤细胞增殖(P＜0.05)、酪氨酸酶活性(P＜0.01)、黑素合成(P＜0.05)均有促进作用,c-KIT和TRP-2蛋白表达量分别比空白对照组增加8.81%和10.58%(P＜0.05)。结论(1)非光敏中药组方——中药2号外搽治疗白癜风有效的机理可能与促进细胞移行、黑素转运有关。(2)酪醇和胡椒碱均能促进小鼠B16黑素瘤细胞的黑素合成,胡椒碱具有促进细胞增殖的作用;其机制可能部分通过上调酪氨酸酶活性和c-KIT、TRP-2蛋白表达而发挥作用。(3)本实验为白癜风治疗外用中药组方开辟新的思路,为临床选药提供了更多的实验依据。