将游离的肠系膜动脉放入冰冷、充以 95% O2和5%CO2的 Kreb’s 液,仔细去除血管上的结缔组织, 将动脉剪成 1-2 mm 的小段,然后将血管环套在不锈钢小钩上,放入 37℃、充以 95% O2和 5% CO2的 Kreb’s 液中,并连接在张力传感器上。给血管环加 0.5 g 的前负荷,在 Kreb’s 液中平衡至少 60 分钟以上,在此过程中,孵育血管环的液体每 15 min 换 1 次,并使前负荷维持在 0.5 g。加入 1.0μmol/L 的 NE 检测标本活性(收缩幅度小于 0.5g 者弃去),然后冲洗使血管张力恢复到基线。稳定 30 分钟后重复给予 NE,待血管收缩达到稳定值。采用细钢丝插入血管腔中滚动完成去内皮。用 10 μmol/L 的 Ach 对血管环是否有舒张反应作为判断血管内皮是否完整的标准。 本课题实验在检测不同组别和不同时间点的肠系膜动脉张力时,另外加入 CaR 的激动剂 10µM 的 calindol 孵育 20 分钟,和/或孵育后加入 100µM NaHS(H2S的供体)的组别,说明 CaR 被活化及 H2S 增加对观察肠系膜动脉张力的影响,进一步阐明 CaR 与 CSE 在糖尿病模型中对肠系膜动脉张力的影响。
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