小球藻(Chlorella)为绿藻门小球藻属普生性单细胞绿藻,是一种球形单细胞淡水藻类,直径3~8微米,是地球上最早的生命之一,出现在20多亿年前,是一种高效的光合植物,以光合自养生长繁殖,分布极广,近年来广泛用于固碳、生物柴油等附加值产物生产等方面,受到世界各国研究学者的关注。如何培养小球藻是做好小球藻研究的第一步,接下来跟着我一起学习吧。
培养基
小球藻培养基通常采用SE培养基及BG-11培养基等,主要组成成分如下:
SE培养基:
SE | g/L |
NaNO3 | 0.25 |
K2HPO4.3H2O | 0.075 |
MgSO4.7H2O | 0.075 |
CaCl2.2H2O | 0.025 |
KH2PO4 | 0.175 |
NaCl | 0.025 |
Soilextract(土壤提取液) | 40 |
FeCl3·6H2O | 0.005 |
Fe-EDTA | 1(ml/l) |
A5 solution | 1(ml/l) |
distilled water | 58(ml/l) |
A5溶液配制方法:
A5 | mg/100ml |
H3BO3 | 286 |
ZnSO4·7H2O | 22 |
MnCl2·4H2O | 181 |
CuSO4·5H2O | 7.9 |
(NH4)6Mo7O2·4H2O | 3.9 |
按按上述称量药品,溶于100ml水即可。
EDTA-Fe的配置方法:
A液 | Na2EDTA | 1g |
Distilled water | 50ml | |
B液 | FeCl3·6H2O | 81mg |
HCl(0.1mol/L) | 50ml |
土壤提取液配制方法:取花园土未施过肥200g置于烧杯或三角瓶中,加入蒸馏水1000毫升,瓶口用透气塞封口,在水浴中沸水加热3小时,冷却,沉淀24小时,此过程连续进行3次,然后过滤,取上清液,于高压灭菌锅中灭菌后于4℃冰箱中保存备用。
BG-11培养基:
成分 | 浓度(g·L-1) |
NaNO3 | 1.5 |
K2HPO4·3H2O | 0.04 |
MgSO4·7H2O | 0.075 |
CaCl2·2H2O | 0.036 |
Citric acid | 0.006 |
Ferric ammonium citrate | 0.006 |
EDTANa2 | 0.001 |
Na2CO3 | 0.02 |
A5 | 1mL |
Distilled water | 919 |
成分 | 浓度(g·L-1) |
H3BO3 | 2.86 |
MnCl2·H2O | 1.81 |
ZnSO4·7H2O | 0.222 |
CuSO4·5H2O | 0.079 |
Na2MoO4·2H2O | 0.390 |
Co(NO3)·6H2O | 0.049 |
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灭菌
配置好的培养液需要进行灭菌处理,常用的实验室灭菌方法是使用高温灭菌锅在121℃条件下,灭菌30min。实验用具也需要进行灭菌处理,如果不能使用高温灭菌锅灭菌是,可以采用酒精浸泡灭菌,或者紫外照射灭菌,也能取得类似的灭菌效果。
培养条件
温度:25~30℃;
光照:自然光或人工光源,12:12小时光暗比,最适宜光照为5000~10000Lux;
pH:最适pH在6~9.5之间,过高或者过低都会影响小球藻生长;
通气:增强培养液气体扰动,促进传质。
小球藻生长受培养条件的影响较大,因此在实验过程中应尽可能的控制小球藻在最适的生长范围内,如果超过最适范围,将会通过不同方面对小球藻生长造成影响,例如温度较高小球藻将会出现变黄,生长减缓,甚至发生沉降,例如在养殖过程中由于持续高温等原因产生的倒藻现象,这一现象对于养殖将产生较大危害。
纯化
藻种使用一定时间时,需要进行纯化处理,以取得更好的实验效果。
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