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小球藻培养,这一篇就够了!

小球藻(Chlorella)为绿藻门小球藻属普生性单细胞绿藻,是一种球形单细胞淡水藻类,直径38微米,是地球上最早的生命之一,出现在20多亿年前,是一种高效的光合植物,以光合自养生长繁殖,分布极广,近年来广泛用于固碳、生物柴油等附加值产物生产等方面,受到世界各国研究学者的关注。如何培养小球藻是做好小球藻研究的第一步,接下来跟着我一起学习吧。 

培养基

小球藻培养基通常采用SE培养基及BG-11培养基等,主要组成成分如下:

SE培养基:

SE

g/L

NaNO3

0.25

                                       K2HPO4.3H2O

0.075

MgSO4.7H2O

0.075

CaCl2.2H2O

0.025

KH2PO4

0.175

NaCl

0.025

Soilextract(土壤提取液)

40

FeCl3·6H2O

0.005

Fe-EDTA

1(ml/l)

A5  solution

1(ml/l)

distilled  water

58(ml/l)

A5溶液配制方法:

A5

mg/100ml

H3BO3

286

ZnSO4·7H2O

22

MnCl2·4H2O

181

CuSO4·5H2O

7.9

(NH4)6Mo7O2·4H2O

3.9

按按上述称量药品,溶于100ml水即可。

EDTA-Fe的配置方法:

A

Na2EDTA

1g

Distilled  water

50ml

B

FeCl3·6H2O

81mg

HCl0.1mol/L

50ml

分别配置A,B液,充分搅拌溶解后,将A,B液混合搅拌均匀即可。土壤提取液40 mL/L

土壤提取液配制方法:取花园土未施过肥200g置于烧杯或三角瓶中,加入蒸馏水1000毫升,瓶口用透气塞封口,在水浴中沸水加热3小时,冷却,沉淀24小时,此过程连续进行3次,然后过滤,取上清液,于高压灭菌锅中灭菌后于4℃冰箱中保存备用。

BG-11培养基:

成分

浓度(g·L-1)

NaNO3

1.5

K2HPO4·3H2O

0.04

MgSO4·7H2O

0.075

CaCl2·2H2O

0.036

Citric  acid

0.006

Ferric  ammonium citrate

0.006

EDTANa2

0.001

Na2CO3

0.02

A5

1mL

Distilled  water

919

成分

浓度(g·L-1

H3BO3

2.86

MnCl2·H2O

1.81

ZnSO4·7H2O

0.222

CuSO4·5H2O

0.079

Na2MoO4·2H2O

0.390

Co(NO3)·6H2O

0.049

更多培养基组成成分请大家关注中科院藻种库获取相关信息

灭菌

配置好的培养液需要进行灭菌处理,常用的实验室灭菌方法是使用高温灭菌锅在121条件下,灭菌30min。实验用具也需要进行灭菌处理,如果不能使用高温灭菌锅灭菌是,可以采用酒精浸泡灭菌,或者紫外照射灭菌,也能取得类似的灭菌效果。

培养条件

温度:25~30℃;

光照:自然光或人工光源,1212小时光暗比,最适宜光照为500010000Lux

pH:最适pH6~9.5之间,过高或者过低都会影响小球藻生长;

通气:增强培养液气体扰动,促进传质。

小球藻生长受培养条件的影响较大,因此在实验过程中应尽可能的控制小球藻在最适的生长范围内,如果超过最适范围,将会通过不同方面对小球藻生长造成影响,例如温度较高小球藻将会出现变黄,生长减缓,甚至发生沉降,例如在养殖过程中由于持续高温等原因产生的倒藻现象,这一现象对于养殖将产生较大危害。

纯化

藻种使用一定时间时,需要进行纯化处理,以取得更好的实验效果。

后续公众号将推送关于微藻保种、纯化等方面的相关知识,请大家持续关注。


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