酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)混合液
将平衡酚、氯仿和异戊醇按25:24:1混合。在100mmol/L Tris·CI(pH8.0)缓冲液之下,4避光可存放一个月。
酚的平衡
1、从-20℃冰冻室中取出经过液化的酚,使其温度升至室温,然后在68℃使酚溶解,加入羟基喹啉至终浓度为0.1%。
2、为熔化酚,加入等体积的缓冲液[0.5mol/L Tris·CI(pH8.0)],用磁力搅拌15分钟,待两相分开后,要尽可能彻底地移出上层水相液。
3、加等体积的0.1mol/L Tris·CI(pH8.0)到酚中,搅拌15分钟,然后按步骤2所述移出水相液。重复抽提,直到酚相pH值大于7.8。
4、酚达平衡后,加入0.1体积含有0.2% -巯基乙醇的0.1mol/L Tris·CI(pH8.0)。这种形式的酚可处于10mmol/L Tris·CI(pH8.0)缓冲液之下,在4℃避光入一个月。
酚:氯仿混合液
把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris·CI(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积10mmol/L Tris·CI(pH7.6)缓冲液层,保存于4℃。
小心:酚腐蚀性很强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜,穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的皮肤部位应用大量的水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。
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